夏垒，韩雪，董莉，夏艳秋

    1.上海中医药大学，上海 201203；2.西安市中医医院，陕西 西安 710016；3.上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院，上海 200437

    复发性流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)是常见的妊娠并发症，发生率为1%～5%，目前仍有超过半数的RSA病因尚不明确。无论何种病因，母胎界面局部微环境在妊娠建立和维持中都起到重要作用。母胎界面中胎盘微血管的生成及胎盘血管网络的构建对妊娠维持至关重要。有学者认为，RSA的发生与妊娠期母体子宫螺旋动脉和胚胎绒毛血管中形成微小血栓有关，其可能导致子宫-胎盘循环血液灌注不良，增加妊娠丢失的风险。

    补肾活血方是国医大师朱南孙教授临床治疗RSA的经验方，前期研究显示，该方有助于改善患者卵巢血流动力情况，调节炎症因子平衡。本研究在前期研究基础上观察该方对RSA小鼠母胎界面血管生成及微小血栓的影响，进一步探讨其作用机制，以期为临床应用和后续研究提供参考。

    1 实验材料

    1.1 动物

    SPF级雌性CBA/J小鼠40只、雄性DBA/2J小鼠15 只、雄性BALB/c 小鼠5 只，6～7 周龄，体质量(20±2)g，上海吉辉实验动物有限公司提供，动物生产许可证号SCXK(沪)2017-0012。常规饲养于上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院实验动物中心SPF级动物房，温度25～27 ℃，湿度40%～50%，12 h光照/黑暗循环，自由摄食饮水。

    1.2 药物

    补肾活血方(黄芪20 g，党参20 g，丹参20 g，当归20 g，巴戟天15 g，淫羊藿15 g，菟丝子12 g，熟地黄12 g，覆盆子12 g)，由上海中医药大学中药制剂中心制成汤剂，每1 mL含原药材1.46 g，置于4 ℃冰箱冷藏备用。地屈孕酮片，荷兰Abbott Biologicals B.V.，10 mg/片，批号360591，药片碾碎后用蒸馏水溶解，制成浓度为1 mg/mL溶液。

    1.3 主要试剂与仪器

    HE染色试剂盒、Trizol、一氧化氮(NO)检测试剂盒、RIPA裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒，上海碧云天生物技术有限公司，批号分别为C0105M、R0016、S0021S、P0013、P0009；RT-PCR 试剂盒，日本TaKaRa公司，批号RR047A；血管内皮生长因子(VEGF)抗体、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)抗体、GAPDH 抗体、HRP 标记羊抗鼠IgG、HRP 标记羊抗兔IgG ......