杨丹，孙银凤，白敏，宋冰，张延英，汪永锋，康万荣

    1.甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730000；2.甘肃省实验动物行业技术中心，甘肃 兰州 730000

    急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)由多种原因引起，发病机制复杂。近年来，其发病率和病死率呈上升趋势，常出现炎症瀑布效应，导致全身炎症反应综合征和多器官功能障碍综合征，其中以急性肺损伤最为常见，是导致患者死亡的主要原因，其病理机制主要是炎症反应与抗炎反应失调，而细胞凋亡在二者之间起到调节作用。PI3K/AKT信号通路与细胞凋亡密切相关，是AP引发肺损伤的重要信号转导通路。其通过调节肺泡上皮细胞、中性粒细胞、巨噬细胞活性，介导肺损伤发生发展。本课题组前期研究发现，大黄牡丹汤可下调AP模型大鼠血清炎症因子，改善胰腺组织病理变化，但对细胞凋亡的调控机制并不明确。因此，本研究从PI3K/AKT信号通路观察大黄牡丹汤对AP模型大鼠肺组织细胞凋亡及炎症反应的影响，明确其在AP肺损伤早期病理反应中的作用机制，为临床治疗AP肺损伤提供实验依据。

    1 实验材料

    1.1 动物

    2 月龄SPF 级雄性Wistar 大鼠96 只，体质量(200±20)g，甘肃中医药大学实验动物中心提供，动物生产许可证号SCXK(甘)2020-0001。饲养于甘肃中医药大学实验动物中心SPF级屏障实验室，温度21～25 ℃，相对湿度40%～45%，12 h昼夜交替，动物使用许可证号SYXK(甘)2020-0009。动物操作与处理遵循甘肃中医药大学实验动物伦理原则。

    1.2 药物及制备

    大黄牡丹汤(大黄12 g，牡丹皮9 g，芒硝9 g，桃仁12 g，冬瓜子30 g)，饮片购于甘肃中医药大学附属医院，并由该院煎药室制备成原药材浓度为1 g/mL煎剂。醋酸奥曲肽注射液，国药一心制药有限公司，批号171003，0.5 mg/mL。

    1.3 主要试剂与仪器

    大鼠白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，货号分别为ml102828、ml037361、ml002859)；牛磺胆酸钠(北京Solarbio 公司，批号1111J051)；RT-PCR试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司，批号H4104620)；反转录试剂盒(美国Promega公司，批号0000366052)；PI3K抗体(英国Abcam公司，批号GR3192684-9)；p-AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3、GAPDH抗体(美国Immunoway公司 ......