韩栩珂 ，周冬祺 ，王佳艺 ，朱婵 ，邱现良 ，陈一丁 ，陈秋

    1.陕西中医药大学针灸推拿学院，陕西 咸阳 712046； 2.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072；3.泰康西南医学中心，四川 成都 610213； 4.四川大学华西第二医院，四川 成都 610021

    糖尿病神经源性膀胱(diabetic neurogenic bladder，DNB)是糖尿病常见的慢性神经病变之一，主要表现为膀胱储排尿功能异常，通常被描述为膀胱感觉下降、顺应性和容量增加、逼尿肌收缩力受损的三联征[1-2]。糖尿病患者DNB发病率为40%～80%，血糖控制理想的情况下仍为25%，在糖尿病进展10年后出现DNB症状的概率高达50%[3-5]。垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)在膀胱平滑肌收缩舒张过程中发挥重要作用[6]，可能是治疗DNB的关键靶点[7]。PACAP对膀胱平滑肌的调控依赖于环磷酸腺苷(cAMP)，此外，作为cAMP关键底物的蛋白激酶A(PKA)也是影响平滑肌功能的重要分子[8]。膀胱平滑肌收缩活动受肌球蛋白系统细胞内Ca2+水平变化引起的磷酸化、去磷酸化影响[9]。肌球蛋白系统相关收缩元件，如肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和肌球蛋白轻链(MLC)在调控膀胱储尿排尿过程中起关键作用[10-13]。

    针刺被广泛用于治疗膀胱功能障碍和改善神经功能[14-15]。研究报道，电针能有效抑制大鼠膀胱过度活动，改善膀胱顺应性，减少膀胱组织病理损伤，从而改善膀胱功能[16-17]。但其治疗DNB的效应机制尚不明确。因此，本研究通过建立DNB大鼠模型，观察电针对膀胱肌球蛋白系统PACAP/cAMP/PKA信号转导通路的影响，探讨针刺治疗DNB的效应机制。

    1 实验材料

    1.1 动物

    50只SPF级健康SD大鼠，雌性，体质量(200±20)g，购于成都达硕实验动物公司，动物许可证号SYXK(川)2019-189。饲养于标准实验室，温度(22±2)℃，相对湿度50%～60%，12 h明暗交替，自由摄食饮水，适应性饲养7 d后实验。本研究经成都中医药大学附属医院医学伦理委员会审批(2020SL012)。

    1.2 主要试剂及仪器

    链脲佐菌素(STZ，货号S0130，Sigma公司)，柠檬酸缓冲液(货号C2488，Sigma公司)，戊巴比妥钠(货号11715，Sigma公司)，PACAP38、cAMP、PKA ELISA 试剂盒(货号分别为ZC-54700、ZC-36711、ZC-36517 ......