HPLC法测定杯苋甾酮的血药浓度(2)
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3.2.4回收率和精密度试验于空白血液中加入高、中、低3个不同浓度的杯苋甾酮对照品液,制备得到分别含杯苋甾酮浓度为 9.040、2.260、0.565 μg/mL血液样品,测定3个浓度血液中杯苋甾酮的回收率分别为:89.7%、90.2%、93.5%,平均回收率为91.1%,RSD=2.25%(n=5),日内精密度RSD=±3.9%,日间精密度RSD=±7.3%。
4结果与结论
家兔经口服给药后,杯苋甾酮在家兔体内吸收很快,20 min血液中可检出杯苋甾酮(图3);HPLC法测定家兔血液中杯苋甾酮的浓度,分离度好,方法简便、灵敏,可用于杯苋甾酮的血药浓度测定和进一步进行药物代谢动力学研究。
5讨论
1)血样的处理:作者先后采用多种蛋白沉淀方法,和多种萃取方法,包括甲醇、乙腈、丙酮、高氯酸、硫酸铵等方法。结果表明,杯苋甾酮提取率在乙腈、甲醇中较高,且在乙腈中提取较干净、无干扰。因此采用乙腈沉淀蛋白并提取,方法简单,提取率又高。
2)本文采用乙腈20 g、水80 g、磷酸二氢钠1.20 g作为流动相测定兔血浆中杯苋甾酮的浓度,杯苋甾酮的保留时间为14.4 min,平均回收率为85.5%。本方法操作省时、简便,精密度及重现性均较好[8-11]。
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