气导听觉剥夺幼鼠螺旋神经节NSE表达
烯醇,耳蜗,1材料与方法,2结果,3讨论
王枫谢宁田建伟朱晓全武军(1.空军总医院,100142;2.空军航空医学研究所附属医院,100089;3.空军工程大学机要系,100097)
研究发现,多种动物的感觉系统在发育的过程中都有一个关键时期,在这个时期内,去除或者改变传入神经冲动对中枢神经系统的结构和功能可以产生极大的影响[1-3]。听觉剥夺效应(auditory deprivation effect)是1996年由15位著名听力学家组成的Eriksholm工作组讨论提出,并定义为由于声学信息的减少导致的听觉功能的逐渐下降[4]。在现实生活中,越来越多的耳科医生注意到听觉剥夺对耳病患者的听觉产生了不良影响,包括听阈的提高和言语识别率的降低。大脑发生听觉剥夺效应后产生的解剖生理学改变,目前的研究都是通过动物实验间接获得。耳蜗切除是常用的听觉剥夺动物模型的造模方法,因其破坏了耳蜗毛细胞的完整性,不能通过听觉电生理的方法检测动物的听功能,同时使得对听觉传导通路的起始部位——螺旋器(Corti器)的研究无法进行。我们选择幼年动物进行气导听觉剥夺,一方面减少发育关键期听觉系统声音信号的输入,另一方面保持耳蜗的正常结构,目的在于获得听觉剥夺对听觉系统中螺旋神经节发育的影响结果。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 实验动物采用清洁级SD乳鼠60只,雌雄不限,由第四军医大学动物实验中心提供。
1.1.2 试剂 兔抗神经元特异性烯醇化酶 (neuronal specific enolase,NSE)多克隆抗体、SABC试剂盒购自武汉博士德公司。
1.1.3 仪器 听觉电生理检测仪(Biologic,Traveler Express E,USA)。冰冻切片机(德国LEICA CM1850)。
1.2 方法
1.2.1 动物分组 实验动物随机分为对照组和AD(Auditary Deprivation)组。AD组大鼠饲养于密闭隔音室,生后12 d起行耳道填塞至生后42 d;对照组大鼠正常食水、在正常声音环境中饲养。
1.2.2 模型制备 采用文献[5]方法进行耳道填塞(图1)。
1.2.3 脑干诱发电位(ABR)检测 采用听觉电生理检测仪(Biologic,Traveler Express E,USA)于出生后42 d分别对对照组、AD组大鼠进行ABR检测。
将实验动物以2%戊巴比妥钠100 mg/kg行腹腔注射麻醉 ......
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