崔辰莹 张岸平

    人乳头状瘤病毒(human papillomavirius，HPV)是嗜上皮病毒的一种，它包含了大概8 000个碱基对，具有种属特异性，属双链闭环的小DNA病毒。在临床中我们发现，患者在HPV感染以后，被感染的细胞会过度增殖，并且产生恶性的转化。近年来的研究表明[1]，许多人类恶性肿瘤的发生、发展与HPV感染有着密切关系。流行病学和基础研究证明HPV感染是子宫颈癌的主要病因，95%的宫颈癌标本可以检测到HPV[2]。本文通过对1 138例标本HPV分型检测结果的分析，了解秦皇岛地区女性高危型HPV感染特点及HPV感染与宫颈病变之间的关系，为早期防治宫颈癌及癌前病变提供理论依据。

    1 资料和方法

    1.1 标本来源 2012-10—2014-10在秦皇岛市第一医院妇产科门诊就诊及住院治疗的宫颈炎、阴道炎、宫颈癌及疑似患者标本1 138例；年龄16～75岁，平均41岁。

    1.2 标本采集 用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去，将宫颈刷伸入宫颈处，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转3～5圈，慢慢取出宫颈刷，将其放入装有专用细胞保存液的样本管中，送检标本，若送检样本不能马上检测的于4℃保存，并在一周内完成检测。

    1.3 检测方法

    1.3.1 DAN提取 临床标本经过振荡混匀后，从管底部吸取500μL标本，以14 000 r/min离心1 min，把上清液去掉，利用凯普生物化学科技公司生产的基因组提取试剂盒进行HPV-DAN提取。

    1.3.2 PCR扩增 取1μL提取好的DNA样本作为模板进行PCR扩增，20℃ 10 min，95℃ 9 min；95℃ 20 min，55℃ 30 min，72℃ 30 min，做40个循环；在72℃ 5 min后，放置于4℃保存。

    1.3.3 导流杂交 利用HybriMax核酸分子快速杂交仪进行导流杂交：在95℃把25μL的PCR产物加热5 min，然后立即冰水浴至少2 min，进行变性；将已变性DNA样品加入0.5 mL预热至45℃的杂交液，在导流杂交仪上45℃温育10 min后进行导流杂交 ......