肝细胞癌(HCC)是世界上最常见的人类恶性肿瘤细胞之一，是导致癌症相关死亡的第二大原因。尽管最近对肝癌的分子基础和新的化疗方法的认识有了进展，但是仅略微降低了死亡率

    。长链非编码RNA(Long noncoding RNA，LncRNA)是一类长度超过200 nt，没有或有蛋白质编码潜力的转录本。LncRNA通过在不同水平上调控基因表达来发挥作用，包括表观遗传调控、转录(或转录后)和翻译调控

    。已经证实LncRNA参与了机体的发育、分化、凋亡、自噬、炎症和癌症等生理或病理过程

    。最近，越来越多的lncRNA被报道在肝癌的癌变和发展中发挥重要作用

    。HULC是第一个在人类肝癌组织中特异性过表达的LncRNA

    。然而，迄今为止，HULC是否能够调节HCC细胞的自噬尚不清楚。同时，HULC对化疗试剂的反应亦不清楚。本文通过比较对照组 (NOR 组)，基因过表达组(O-HULC组)，基因抑制组(S-HULC组)肝癌Hep G2细胞的自噬，凋亡，侵袭迁移情况，评价HULC对肝癌Hep G2细胞的细胞自噬和化疗耐药的影响机制。以图寻找关键作用通路及作用靶点，为日后肝癌的治疗提供数据基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞及分组 选取美国ATCC细胞库来源的Hep G2细胞。细胞分为3组，NOR组、O-HULC组和S-HULC组。NOR组不做处理，正常培养，O-HULC组转染HULC基因，S-HULC组抑制HULC基因后培养。

    1.2 实验方法

    1.2.1 HULC基因过表达肝癌细胞Hep G2 在感受态的细胞中加入质粒和连接产物，在冰上静置后于45 ℃下迅速水浴，之后再次置于冰上，在含有抗生素的培养板上培养过夜后按照说明书提取质粒并用琼脂糖凝胶电泳检测DNA表达，包括纯度和表达量。质粒转染，将生长状态较好的细胞接种于细胞培养板中，每孔加入含有质粒的无血清培养基，后加入转染试剂，然后加入到培养箱中培养，每隔10 min摇晃一次，6～8 h后更换培养基。目的基因扩增，提取出RNA后进行PCR扩增，得到cDNA后加入引物，以cDNA为模板进行PCR扩增。扩增后用限制性内切酶酶切，而后siRNA转染。

    1.2.2 肝癌Hep G2细胞侵袭和迁移量检测 ①细胞侵袭能力检测：将细胞加入到Transwell的上室中，加入4 μmol/L的奥沙利铂溶液(美国Sigma公司)之后用伊红染料将穿过基质胶包裹的下室的肝癌细胞进行染色。然后显微镜下进行细胞计数。②细胞迁移能力检测：将加入奥沙利铂溶液的细胞加入到Transwell的上室中 ......