rhG-CSF包含体处理工艺改进(2)
1.3.2 原工艺和改进后工艺
赛格力一批发酵所获得的包含体分成4个亚批进行处理。首先,包含体分别经纯化水、A液、B液洗涤,每次洗涤后均离心收集沉淀。B液洗涤后收集的沉淀,用C液溶解后,收集上清液,然后在上清液中加入冷冻后的丙酮(在冰浴条件下)进行搅拌离心,收集沉淀,最后用变性剂D液溶解,离心获得含变性蛋白的上清液(图1)。![](/images/paper/1006-1533/201715/20171520-1-l.jpg)
改进后工艺流程和改进前一样,只是前5步用管式离心机代替转子离心机,但是考虑到安全原因,丙酮沉淀后的步骤还是保留使用转子离心机。
1.4 检测方法
内毒素检测:按照《中国药典》2015年版通则1143方法1 凝胶法进行检测。
残余DNA测定:按照《中国药典》2015年版通则3407第一法 DNA探针杂交法进行检测。
电泳方法:按照《中国药典》2015年版通则0541第五法SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检测 ......
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赛格力一批发酵所获得的包含体分成4个亚批进行处理。首先,包含体分别经纯化水、A液、B液洗涤,每次洗涤后均离心收集沉淀。B液洗涤后收集的沉淀,用C液溶解后,收集上清液,然后在上清液中加入冷冻后的丙酮(在冰浴条件下)进行搅拌离心,收集沉淀,最后用变性剂D液溶解,离心获得含变性蛋白的上清液(图1)。
![](/images/paper/1006-1533/201715/20171520-1-l.jpg)
改进后工艺流程和改进前一样,只是前5步用管式离心机代替转子离心机,但是考虑到安全原因,丙酮沉淀后的步骤还是保留使用转子离心机。
1.4 检测方法
内毒素检测:按照《中国药典》2015年版通则1143方法1 凝胶法进行检测。
残余DNA测定:按照《中国药典》2015年版通则3407第一法 DNA探针杂交法进行检测。
电泳方法:按照《中国药典》2015年版通则0541第五法SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检测 ......
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