关于起草《自体CAR-T免疫细胞产品生产指南(讨论稿)》的思考(2)
1 编撰依据
《药品生产质量管理规范(2010年修订)》[5]、《药品生产质量管理规范(2010年修订)》附录1“无菌药品”[6]和欧盟发布的《Guidelines on Good Manufacturing Practice specific to Advanced Therapy Medicinal Products》[7]。
2 主要内容
CAR-T是一类新型免疫细胞产品，其由符合伦理学要求的细胞经体外培养和嵌入针对特定抗体的抗原制成。本生产指南旨在为CAR-T类免疫细胞产品的规范生产和质量控制提供参考和借鉴，并探讨了风险控制策略。
2.1 厂址选择和厂房整体布局
为降低污染和交叉污染风险，厂房、生产设施及设备应根据所生产药品的特性、工艺流程和相应的洁净度级别要求合理设计、布局和使用。
, 百拇医药
2.1.1 生产区和贮存区
生产区和贮存区应有足够的空间，以确保能有序地存放设备、物料、中间产品、待包装产品和成品，避免不同产品或物料的混淆、交叉污染，避免生产或质量控制操作发生遗漏或差错。
应根据药品品种、生产操作要求和外部环境状况等配置空调净化系统，使生产区有效通风，并有温度、湿度控制和空气净化过滤，保证药品的生产环境符合要求。洁净区与非洁净区之间、不同级别洁净区之间的压差应≥10 Pa；必要时，相同洁净度级别的不同功能区域(操作间)之间也应保持适当的压差梯度。
2.1.2 生产中间控制区
生产中间控制区如设置在洁净生产车间内部，应避免交叉污染、混淆等药品质量风险。
2.1.3 仓储区
, 百拇医药
仓储区的设置和分区应避免不同产品或物料的混淆和交叉污染。①体细胞接收区：应每份体细胞均贴有完整标签，进行唯一识别码登记、编录和标识。应有独立的血液样本存放冰箱，并根据生产工艺合理制定血液样本的接收、储存和发放规程。②原辅料储存区：同药品GMP。③CAR-T产品储存区：应注意液氮罐补充液氮的便捷性，并对液氮储存条件进行适当的监测。使用不同液氮罐或同一液氮罐、但不同栏架储存待检品、成品、留样和稳定性考察的CAR-T产品时，应进行必要的风险评估，并采取相应的控制措施。
2.1.4 质量控制区
一般需分为体细胞检测区、细胞检测区、微生物检测区、理化检测区和分子检测区等。体细胞检测区应独立设置，使用专用检验设备，并应配备原位灭活或消毒的设备。如有空调净化系统，应独立设置。应有独立的分子检测区域，以避免气溶胶的产生与交叉污染。分子检测区域应至少包括试剂准备、标本制备和基因扩增三个功能操作间，三个功能操作间应相互独立，避免空气的直接流通，以避免交叉污染。如具备条件，建议每个区域配置缓冲间。基于风险，部分区域应设置独立的废气排放系统。
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2.1.5 辅助区
包括清洗清洁区、灭菌区和废弃物处理区。应有独立的废弃物处理区，对生物活性物质进行灭活处理。
2.2 生产设备
主要生产设备如生物安全柜、离心机、冰箱、显微镜、纯化设备、过滤设备和泵等的设计或选型、校验、清洗和维护的要求同药品GMP。宜使用一次性系统，以避免污染和交叉污染。
CAR-T产品生产中需用到一些特殊设备。①分选设备：分选设备一般为含有磁力的设备系统，操作和放置时应注意周围不得有磁性物体，以避免干扰及长期干扰后产生磁性。②中间体检测用到的设备：常用的中间体检测设备如流式细胞仪、细胞计数仪和显微镜的设计或选型、校验、清洗和维护的要求同药品GMP。
质粒、病毒载体和CAR-T产品的生产区应分别设置为独立区域，病毒载体和CAR-T产品的生产不应共用空调净化系统。
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2.2.1 质粒生产设备
在CAR-T产品的生产过程中，如有质粒中间品，应有独立的质粒生产区。质粒生产区内应至少包括发酵、纯化和除菌分装三个功能区，其中发酵和纯化功能区至少为控制区，除菌分装功能区的洁净度至少为“C+A”。宜选用耐高温高压灭菌的系统或一次性发酵系统，以避免不同种质粒或不同批次质粒的交叉污染。如未使用耐高温高压灭菌的系统或一次性发酵系统，则至少每种质粒发酵使用一种系统。不同种质粒的纯化不得共用同一纯化层析柱和层析介质。由于质粒的生产宿主是革兰阴性菌大肠埃希菌，纯化系统应确保能有效去除宿主菌残留的内毒素。
2.2.2 病毒载体生产设备
病毒载体的生产区应符合药品GMP要求。病毒载体生产区应至少分为细胞培养、病毒转染(如有)、病毒纯化和除菌过滤等功能区。应选用耐高温高压灭菌的系统或一次性发酵系统，以避免不同批次的交叉污染及外源性微生物污染。
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2.2.3 CAR-T产品生产设备
CAR-T产品的生产区应符合药品GMP要求。CAR-T产品生产区应至少分为体细胞分离分选、细胞扩增和细胞冷冻(如有)等功能区。CAR-T产品的生产应符合无菌技术操作规范。為避免不同来源T细胞的交叉污染，CAR-T产品生产过程中宜选用一次性生产用耗材。
如CAR-T产品的生产采用非全封闭系统操作，应避免不同供者来源体细胞的CAR-T产品生产发生交叉污染、污染和混淆，操作完毕后须清场；如CAR-T产品的生产采用了全封闭系统操作，应注意避免在取样、加样等环节可能发生的交叉污染。对部分非全封闭系统操作，应按非全封闭系统要求执行。
2.2.4 公用系统
压缩空气、二氧化碳和氧气(同药品GMP要求)。水系统(同药品GMP要求)。
2.3 生产过程
CAR-T产品生产主要分为三个生产过程。①质粒生产过程(如有)：至少包括细菌复苏、细菌扩增、细菌破碎、质粒纯化和除菌过滤等工艺流程。②病毒载体生产过程：至少包括细胞扩增、质粒转染(如有)、病毒收获、病毒纯化和除菌过滤等工艺流程。③CAR-T产品生产过程：至少包括细胞分离、细胞分选(如有)、T细胞激活、病毒感染、细胞扩增、细胞收获和细胞冷冻(如有)等工艺流程。, 百拇医药(王冲 付秋雁 谭建新 于玲莉 刘芬 董正龙 李建平)
《药品生产质量管理规范(2010年修订)》[5]、《药品生产质量管理规范(2010年修订)》附录1“无菌药品”[6]和欧盟发布的《Guidelines on Good Manufacturing Practice specific to Advanced Therapy Medicinal Products》[7]。
2 主要内容
CAR-T是一类新型免疫细胞产品，其由符合伦理学要求的细胞经体外培养和嵌入针对特定抗体的抗原制成。本生产指南旨在为CAR-T类免疫细胞产品的规范生产和质量控制提供参考和借鉴，并探讨了风险控制策略。
2.1 厂址选择和厂房整体布局
为降低污染和交叉污染风险，厂房、生产设施及设备应根据所生产药品的特性、工艺流程和相应的洁净度级别要求合理设计、布局和使用。
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2.1.1 生产区和贮存区
生产区和贮存区应有足够的空间，以确保能有序地存放设备、物料、中间产品、待包装产品和成品，避免不同产品或物料的混淆、交叉污染，避免生产或质量控制操作发生遗漏或差错。
应根据药品品种、生产操作要求和外部环境状况等配置空调净化系统，使生产区有效通风，并有温度、湿度控制和空气净化过滤，保证药品的生产环境符合要求。洁净区与非洁净区之间、不同级别洁净区之间的压差应≥10 Pa；必要时，相同洁净度级别的不同功能区域(操作间)之间也应保持适当的压差梯度。
2.1.2 生产中间控制区
生产中间控制区如设置在洁净生产车间内部，应避免交叉污染、混淆等药品质量风险。
2.1.3 仓储区
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仓储区的设置和分区应避免不同产品或物料的混淆和交叉污染。①体细胞接收区：应每份体细胞均贴有完整标签，进行唯一识别码登记、编录和标识。应有独立的血液样本存放冰箱，并根据生产工艺合理制定血液样本的接收、储存和发放规程。②原辅料储存区：同药品GMP。③CAR-T产品储存区：应注意液氮罐补充液氮的便捷性，并对液氮储存条件进行适当的监测。使用不同液氮罐或同一液氮罐、但不同栏架储存待检品、成品、留样和稳定性考察的CAR-T产品时，应进行必要的风险评估，并采取相应的控制措施。
2.1.4 质量控制区
一般需分为体细胞检测区、细胞检测区、微生物检测区、理化检测区和分子检测区等。体细胞检测区应独立设置，使用专用检验设备，并应配备原位灭活或消毒的设备。如有空调净化系统，应独立设置。应有独立的分子检测区域，以避免气溶胶的产生与交叉污染。分子检测区域应至少包括试剂准备、标本制备和基因扩增三个功能操作间，三个功能操作间应相互独立，避免空气的直接流通，以避免交叉污染。如具备条件，建议每个区域配置缓冲间。基于风险，部分区域应设置独立的废气排放系统。
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2.1.5 辅助区
包括清洗清洁区、灭菌区和废弃物处理区。应有独立的废弃物处理区，对生物活性物质进行灭活处理。
2.2 生产设备
主要生产设备如生物安全柜、离心机、冰箱、显微镜、纯化设备、过滤设备和泵等的设计或选型、校验、清洗和维护的要求同药品GMP。宜使用一次性系统，以避免污染和交叉污染。
CAR-T产品生产中需用到一些特殊设备。①分选设备：分选设备一般为含有磁力的设备系统，操作和放置时应注意周围不得有磁性物体，以避免干扰及长期干扰后产生磁性。②中间体检测用到的设备：常用的中间体检测设备如流式细胞仪、细胞计数仪和显微镜的设计或选型、校验、清洗和维护的要求同药品GMP。
质粒、病毒载体和CAR-T产品的生产区应分别设置为独立区域，病毒载体和CAR-T产品的生产不应共用空调净化系统。
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2.2.1 质粒生产设备
在CAR-T产品的生产过程中，如有质粒中间品，应有独立的质粒生产区。质粒生产区内应至少包括发酵、纯化和除菌分装三个功能区，其中发酵和纯化功能区至少为控制区，除菌分装功能区的洁净度至少为“C+A”。宜选用耐高温高压灭菌的系统或一次性发酵系统，以避免不同种质粒或不同批次质粒的交叉污染。如未使用耐高温高压灭菌的系统或一次性发酵系统，则至少每种质粒发酵使用一种系统。不同种质粒的纯化不得共用同一纯化层析柱和层析介质。由于质粒的生产宿主是革兰阴性菌大肠埃希菌，纯化系统应确保能有效去除宿主菌残留的内毒素。
2.2.2 病毒载体生产设备
病毒载体的生产区应符合药品GMP要求。病毒载体生产区应至少分为细胞培养、病毒转染(如有)、病毒纯化和除菌过滤等功能区。应选用耐高温高压灭菌的系统或一次性发酵系统，以避免不同批次的交叉污染及外源性微生物污染。
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2.2.3 CAR-T产品生产设备
CAR-T产品的生产区应符合药品GMP要求。CAR-T产品生产区应至少分为体细胞分离分选、细胞扩增和细胞冷冻(如有)等功能区。CAR-T产品的生产应符合无菌技术操作规范。為避免不同来源T细胞的交叉污染，CAR-T产品生产过程中宜选用一次性生产用耗材。
如CAR-T产品的生产采用非全封闭系统操作，应避免不同供者来源体细胞的CAR-T产品生产发生交叉污染、污染和混淆，操作完毕后须清场；如CAR-T产品的生产采用了全封闭系统操作，应注意避免在取样、加样等环节可能发生的交叉污染。对部分非全封闭系统操作，应按非全封闭系统要求执行。
2.2.4 公用系统
压缩空气、二氧化碳和氧气(同药品GMP要求)。水系统(同药品GMP要求)。
2.3 生产过程
CAR-T产品生产主要分为三个生产过程。①质粒生产过程(如有)：至少包括细菌复苏、细菌扩增、细菌破碎、质粒纯化和除菌过滤等工艺流程。②病毒载体生产过程：至少包括细胞扩增、质粒转染(如有)、病毒收获、病毒纯化和除菌过滤等工艺流程。③CAR-T产品生产过程：至少包括细胞分离、细胞分选(如有)、T细胞激活、病毒感染、细胞扩增、细胞收获和细胞冷冻(如有)等工艺流程。, 百拇医药(王冲 付秋雁 谭建新 于玲莉 刘芬 董正龙 李建平)