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编号:13307792
酶联免疫吸附测定中封闭液的作用与选择(2)
http://www.100md.com 2018年4月15日 《上海医药》 2018年第11期
     1.2 脱脂奶粉和酪蛋白

    脱脂奶粉的常用浓度为0.1% ~ 5%,其售价相对便宜,但批间质量差异较大。有研究显示,在候选的几种脱脂奶粉中只有一种有可接受的批间一致性和稳定性[2]。此外,无论是国产、还是进口的脱脂奶粉,如保存不当,都会很快变质。酪蛋白是脱脂奶粉的组分之一,其能用作一种稳定的封闭剂。

    脱脂奶粉在缓冲溶液中较纯酪蛋白更易分散。鉴于这个特点,脱脂奶粉对一些硬塑料制固相载体表面的封闭效果较纯酪蛋白好。但脱脂奶粉封闭液也存在着一些与反应性相关的缺点:①含有磷酸酪蛋白,会与抗磷酸酪蛋白抗体发生交叉反应;②有些脱脂奶粉含有组蛋白,会干扰抗DNA抗体的测定;③有些脱脂奶粉含有可抑制碱性磷酸酶活性的成分;④会与亲合素发生交叉反应。

    1.3 明胶

    明胶用作封闭剂也较普遍,但其有一些较大的缺点:①单用明胶封闭液的封闭效果较差;②明胶主要通过蛋白-蛋白相互作用产生封闭作用,但其有时亦会遮蔽特异性的固相载体表面结合蛋白,从而影响免疫反应性;③明胶较差的封闭效果和蛋白遮蔽性质还会导致测定时的系统本底偏高和敏感性降低;④明胶同样存在批间质量差异问题。

    明胶封闭液的最大特点是不会与哺乳动物抗体和蛋白A发生交叉反应。

    1.4 全血清

    对于非常困难的固相载体表面封闭,一般推荐选用10%全血清。后者由于所含分子的多样性,能有效封闭固相载体表面的非特异性位点。

    用作封闭剂的全血清应尽量不选用兔或鼠来源的 ......
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