胡素招 钱暮霜

    (上海奥博生物医药股份有限公司 上海 201203)

    基因毒性杂质，是指能够直接或间接(如通过代谢激活之后)与DNA(主要是其碱基)发生化学反应的物质。近年来，陆续从沙坦类、雷尼替丁、二甲双胍等药物中检测出亚硝胺类杂质残留[1-6]。2020年5月，国家药监局也发布了《化学药物中亚硝胺类杂质研究技术指导原则(试行)》[7]指导纲领。基因毒性杂质的控制贯穿药品研制的全生命周期，是一项复杂而精细的工程。

    硼酸及硼酸酯已成为有机合成中重要片段，是药物中的关键中间体。2-氟-3-甲氧基苯硼酸在噁拉戈利钠的合成工艺中作为起始物料被使用，采用(定量)构-效关系(QSAR)方法进行计算机模拟的毒性评估，以预测细菌突变试验的结果[8]。通过CASE Ultra构-效模拟软件分析2-氟-3-甲氧基苯硼酸为阳性，在PHARM_BMUT数据库中QSAR计算的概率为57.2%，在GT_EXPERT数据库中QSAR计算的概率为62.1%，因此，该化合物风险评估归为“有警示结构，与原料药结构无关；无致突变性数据”的3类杂质。参考ICH M7[9-10]，监管部门把1.5 μg/d的可接受摄入量作为基因毒性杂质的毒理学阈值，药品噁拉戈利钠的口服最大日剂量为400 mg，故需要在中间体、粗品或成品中控制2-氟-3-甲氧基苯硼酸的限度为0.000 38%。通过衍生化-液质联用法来检测噁拉戈利钠中的2-氟-3-甲氧基苯硼酸的含量，采用铵离子螯合和化学衍生法(图1)技术，在流动相体系中添加10 mmol/L的铵离子，采用配备常规ESI源的液质联用(LCMS)单四级杆分析系统，在SIM模式下用m/z 299.1 (299.1为硼酸酯螯合铵离子[M+NH4]+)进行定量分析，灵敏度高、方法简单、结果可靠、重现性好，满足目前法规规定的限量要求。

    图1 2-氟-3-甲氧基苯硼酸化学结构式和衍生化反应

    1 材料和方法

    1.1 试剂和样品

    乙腈、甲酸、二甲亚砜、乙酸均为色谱级 ......