高效液相色谱法检测克感利咽口服液药效物质的应用(1)
【摘要】目的:利用高效液相色谱法(HPLC),研究并建立了制备克感利咽口服液主成分色谱图的色谱方法。方法:色谱条件: Kromasil C18柱 (4.6mm×250mm,5μm); 流动相为乙腈和0.25%甲酸水溶液,梯度洗脱,流量1.0mL/min;柱温22℃;用二极管阵列检测器记录各个色谱峰的紫外吸收光谱,色谱检测波长254nm。结果:在优化实验条件下,同时检测11种药效物质。结论:利用HPLC,从克感利咽口服液中鉴别出含有黄芩苷、黄芩素、绿原酸、栀子苷4种主要化学成分。 【关键词】高效液相色谱;药效物质
Application of high performance liquid chromatographyto
determinepharmacodynamic substances in Rheumand Pharyngitis Oral Solution
XIE Chengen1 DING Jinlong2 LIU Hong1
【Abstract】Objective: Using High Performance Liquid Chromatography (HPLC), the chromatogram and preparative method were studied and established for qualitative analysis on the chemical compositions of Rheumand Pharyngitis Oral Solution. Methods: HPLC conditions: Kromasil C18 column (4.6mm × 250mm, 5μm); mobile phase of acetonitrile and 0.25% formic acid aqueous solution, gradient elution, flow rate 1.0mL/min; column temperature 22 ℃; with diode array detector records of all chromatographic peaks of UV absorption spectra, HPLC detection wavelength 254nm. Results: Optimization of experimental conditions, 11 kinds of pharmacodynamic substances could be detectedin the same time. Conclusion: The use of HPLC, identify Rheumand Pharyngitis Oral Solution containing baicalin, baicalein, chlorogenic acid and geniposide, four kinds of main chemical components.
【Key words】HPLC;pharmacodynamic substances
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1006-1959(2009)08-0152-02
应用现代仪器分析技术对中药成分进行分离和分析,结合药理学的药效试验,构成了探讨中药物质基础研究的基本方法。研究表明[1],克感利咽口服液由金银花、黄芩、栀子等14味中药材组成,对甲3型、乙型流感病毒以及呼吸道常见致病菌有杀伤和抑制繁殖作用。本研究利用HPLC方法对黄芩苷、黄芩素、绿原酸、栀子苷、升麻苷、连翘苷、甘草苷、甘草酸铵、5-0-甲基维斯阿米醇苷、次野鸢尾黄素、胡薄荷酮11种混合对照品及克感利咽口服液进行色谱分析,综合各样品色谱峰保留时间及紫外吸收光谱信息,建立克感利咽口服液主成分HPLC色谱图制备方法,对其中的主要药效物质进行定性检测。
1 材料与方法
1.1 仪器:Waters 2695型高效液相色谱仪, 2996PDA检测器,Empower色谱工作站(美国Waters公司)。
1.2 对照品及试品溶液制备:分别取对照品(中国药品生物制品检定所):黄芩苷0.00203g、黄芩素0.00153g、绿原酸0.00190g、栀子苷0.00141g、升麻苷0.00133g、连翘苷0.00138g、甘草苷0.00235g、甘草酸铵0.00230g、5-0-甲基维斯阿米醇苷0.00156g、次野鸢尾黄素0.00125g、胡薄荷酮0.00152g置10ml容量瓶中,加甲醇溶解,摇匀,定容至刻度,以0.45μm微孔滤膜过滤,滤液作为混合对照品供试溶液。精密吸取克感利咽口服液(广州王老吉药业股份有限公司)2ml,置25ml量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,摇匀,以0.45μm微孔滤膜过滤,滤液作为克感利咽口服液样品溶液。
1.3 试剂:甲醇和乙腈均为色谱纯(美国Tedia公司),甲酸为分析纯(天津市科密欧化学试剂开发公司);水为超纯水。
1.4 方法:色谱条件为色谱柱:迪马Kromasil C18柱 (4.6mm×250mm,5μm);保护柱:Phenomenex KJ0-4282 C18 (4.0mm×3.0mm);二元梯度流动相,A为0.25%甲酸水溶液,B为乙腈,洗脱梯度:0—10min(2% B—5% B),10—30min(5%B—15% B),30—60min(15% B—30% B),60—75min(30% B—60% B),75—80min(60% B),80—85min(60% B—2% B);流速:1mL/min;柱温:22℃;检测波长:254nm;进样量:10μL。
2结果与讨论
2.1 色谱条件的选择:结合一些相关的文献报道[2-4],对色谱条件进行优化。实验分别以乙腈-0.25%甲酸水溶液为流动相1,甲醇-0.25%甲酸水溶液为流动相2,乙腈与甲醇流动相梯度变化。与甲醇相比,乙腈作为混合流动相中的有机相时,样品完成单个样品进样需时明显较短,而且所能提供的样品信息明显较多,色谱峰的分离度也较高。实验分别考察了甲酸、乙酸和磷酸对色谱峰的影响,固定水相中弱酸浓度为0.25%,分别以乙腈-0.25%甲酸水溶液为流动相1,乙腈-0.25%乙酸水溶液为流动相2,乙腈-0.25%磷酸水溶液为流动相3,分别以0.25%甲酸、乙酸和磷酸为昆混合流动相的水相时,对色谱图总体上并未表现出显著的差异;但在局部存在一定差异,甲酸优于乙酸,与磷酸效果类似。实验进而对甲酸浓度的选择进行了考察。不同浓度甲酸水溶液(1.0%、0.5%、0.25%)对色谱图并未表现出显著的差异,但在一些细节部位,0.25%浓度的甲酸获得的色谱峰有着更好的分离度,反映出更多一些信息。按照对样品稳定性及对色谱柱适用条件的选择原则,本实验验最终确定了1.4的流动相条件。在20~30℃色谱柱温对克感利咽口服液主成分色谱图并无显著影响,同时考虑到本实验所有仪器设备情况,实验选择色谱柱柱温22℃。
分别考察在不同检测波长(220nm、241nm、254 nm、265nm、277nm、300nm、327nm、360nm)下的色谱图,其中以254nm下的信息量较为丰富,而且色谱峰的表观丰度高,选择254nm作为制备色谱图的检测波长。, 百拇医药(谢承恩 丁金龙 刘 虹)
Application of high performance liquid chromatographyto
determinepharmacodynamic substances in Rheumand Pharyngitis Oral Solution
XIE Chengen1 DING Jinlong2 LIU Hong1
【Abstract】Objective: Using High Performance Liquid Chromatography (HPLC), the chromatogram and preparative method were studied and established for qualitative analysis on the chemical compositions of Rheumand Pharyngitis Oral Solution. Methods: HPLC conditions: Kromasil C18 column (4.6mm × 250mm, 5μm); mobile phase of acetonitrile and 0.25% formic acid aqueous solution, gradient elution, flow rate 1.0mL/min; column temperature 22 ℃; with diode array detector records of all chromatographic peaks of UV absorption spectra, HPLC detection wavelength 254nm. Results: Optimization of experimental conditions, 11 kinds of pharmacodynamic substances could be detectedin the same time. Conclusion: The use of HPLC, identify Rheumand Pharyngitis Oral Solution containing baicalin, baicalein, chlorogenic acid and geniposide, four kinds of main chemical components.
【Key words】HPLC;pharmacodynamic substances
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1006-1959(2009)08-0152-02
应用现代仪器分析技术对中药成分进行分离和分析,结合药理学的药效试验,构成了探讨中药物质基础研究的基本方法。研究表明[1],克感利咽口服液由金银花、黄芩、栀子等14味中药材组成,对甲3型、乙型流感病毒以及呼吸道常见致病菌有杀伤和抑制繁殖作用。本研究利用HPLC方法对黄芩苷、黄芩素、绿原酸、栀子苷、升麻苷、连翘苷、甘草苷、甘草酸铵、5-0-甲基维斯阿米醇苷、次野鸢尾黄素、胡薄荷酮11种混合对照品及克感利咽口服液进行色谱分析,综合各样品色谱峰保留时间及紫外吸收光谱信息,建立克感利咽口服液主成分HPLC色谱图制备方法,对其中的主要药效物质进行定性检测。
1 材料与方法
1.1 仪器:Waters 2695型高效液相色谱仪, 2996PDA检测器,Empower色谱工作站(美国Waters公司)。
1.2 对照品及试品溶液制备:分别取对照品(中国药品生物制品检定所):黄芩苷0.00203g、黄芩素0.00153g、绿原酸0.00190g、栀子苷0.00141g、升麻苷0.00133g、连翘苷0.00138g、甘草苷0.00235g、甘草酸铵0.00230g、5-0-甲基维斯阿米醇苷0.00156g、次野鸢尾黄素0.00125g、胡薄荷酮0.00152g置10ml容量瓶中,加甲醇溶解,摇匀,定容至刻度,以0.45μm微孔滤膜过滤,滤液作为混合对照品供试溶液。精密吸取克感利咽口服液(广州王老吉药业股份有限公司)2ml,置25ml量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,摇匀,以0.45μm微孔滤膜过滤,滤液作为克感利咽口服液样品溶液。
1.3 试剂:甲醇和乙腈均为色谱纯(美国Tedia公司),甲酸为分析纯(天津市科密欧化学试剂开发公司);水为超纯水。
1.4 方法:色谱条件为色谱柱:迪马Kromasil C18柱 (4.6mm×250mm,5μm);保护柱:Phenomenex KJ0-4282 C18 (4.0mm×3.0mm);二元梯度流动相,A为0.25%甲酸水溶液,B为乙腈,洗脱梯度:0—10min(2% B—5% B),10—30min(5%B—15% B),30—60min(15% B—30% B),60—75min(30% B—60% B),75—80min(60% B),80—85min(60% B—2% B);流速:1mL/min;柱温:22℃;检测波长:254nm;进样量:10μL。
2结果与讨论
2.1 色谱条件的选择:结合一些相关的文献报道[2-4],对色谱条件进行优化。实验分别以乙腈-0.25%甲酸水溶液为流动相1,甲醇-0.25%甲酸水溶液为流动相2,乙腈与甲醇流动相梯度变化。与甲醇相比,乙腈作为混合流动相中的有机相时,样品完成单个样品进样需时明显较短,而且所能提供的样品信息明显较多,色谱峰的分离度也较高。实验分别考察了甲酸、乙酸和磷酸对色谱峰的影响,固定水相中弱酸浓度为0.25%,分别以乙腈-0.25%甲酸水溶液为流动相1,乙腈-0.25%乙酸水溶液为流动相2,乙腈-0.25%磷酸水溶液为流动相3,分别以0.25%甲酸、乙酸和磷酸为昆混合流动相的水相时,对色谱图总体上并未表现出显著的差异;但在局部存在一定差异,甲酸优于乙酸,与磷酸效果类似。实验进而对甲酸浓度的选择进行了考察。不同浓度甲酸水溶液(1.0%、0.5%、0.25%)对色谱图并未表现出显著的差异,但在一些细节部位,0.25%浓度的甲酸获得的色谱峰有着更好的分离度,反映出更多一些信息。按照对样品稳定性及对色谱柱适用条件的选择原则,本实验验最终确定了1.4的流动相条件。在20~30℃色谱柱温对克感利咽口服液主成分色谱图并无显著影响,同时考虑到本实验所有仪器设备情况,实验选择色谱柱柱温22℃。
分别考察在不同检测波长(220nm、241nm、254 nm、265nm、277nm、300nm、327nm、360nm)下的色谱图,其中以254nm下的信息量较为丰富,而且色谱峰的表观丰度高,选择254nm作为制备色谱图的检测波长。, 百拇医药(谢承恩 丁金龙 刘 虹)