实时荧光定量PCR检测MM患者IgH基因重排的表达(2)
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参见附件。
1.3.8定量方法 根据参考文献，比较化疗前后IGH基因拷贝数变化用比较CT值法做相对定量，用数学公式2-ΔΔCT 分析相对基因表达差异。采用SPSS11.5统计软件对结果进行配对秩和检验(数据呈偏态分布)。
2结果
2.1患者DNA含量和纯度 患者DNA得率为1～2ug/g，其吸光度OD260/OD280(纯度值)为>1.7.
2.2管家基因Beta-actin实时荧光定量PCR反应结果 见图1，图2。
30份标本加入管家基因Beta-actin后，用实时荧光定量PCR进行扩增，得出以上扩增曲线，在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，其CT值与原始拷贝数成反比。
以上30份Beta-actin的融解曲线分析，融解曲线的峰值在86.4℃。由于非特异产物(引物二聚体)的解链温度(Tm)相对特异产物低，利用融解曲线可将特异和非特异产物分开。
2.3患者IgH基因实时荧光定量PCR反应结果 见图3，图4。
2.4试验数据 见表1。
2.5 统计结果 15例患者化疗前后Beta-actin基因CT值经配对T检验，P=0.172，其差异无统计学意义(P﹥0.05)。认为Beta-actin基因拷贝数在化疗前后无显著差异，可以作为管家基因。
3讨论
多发性骨髓瘤(multiple myeloma ......
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