外周血淋巴细胞染色体制备影响因素探讨
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摘要：目的 通过对不同培养时间及秋水仙素处理条件、滴片高度等进行比较，建立本室较成熟的外周血淋巴细胞染色体制备技术。方法 随机选择5例待测外周血淋巴细胞染色体患者作为实验对象，采集肝素抗凝静脉全血2ml，各接种4瓶，其中培养时间分别为62h、70h，秋水仙素处理条件为1h(终浓度0.2？滋g/ml)、3h(终浓度0.08？滋g/ml)，滴片高度为2cm、10cm和30cm。计算不同处理条件下的细胞分裂指数，并对结果进行统计分析。结果 培养62h和70h均可获得较多分裂相，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)；秋水仙素处理3h(终浓度0.08？滋g/ml)的分裂相比处理1h(终浓度0.2？滋g/ml)明显增多(P<0.05)；3种滴片高度均可获得染色体分散良好的分裂相。结论 外周血淋巴细胞经过62～70h培养及0.08？滋g/ml秋水仙素处理3h后，可获得良好的染色体分裂相，滴片高度对染色体的分散无影响。
关键词：淋巴细胞；培养；秋水仙素；染色体
为减少出生缺陷、提高人口素质，我国目前已经广泛开展染色体分析技术，其中外周血淋巴细胞染色体核型分析是产前诊断的重要组成部分，同时也是研究染色体与临床疾病关系的重要手段。由于本实验操作过程比较繁琐，影响因素很多，各地方的染色体制备效果也略有不同。故为提高本院细胞遗传室染色体的分析效率和结果的准确性，通过对外周血淋巴细胞染色体制备过程中的几个关键环节进行探讨，以建立适合本实验室的较为成熟的染色体制备方法。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2013年11月在川北医学院附属医院门诊就诊拟行外周血染色体检测的患者5例，采集肝素抗凝静脉全血2ml备用。
1.2 仪器与试剂 恒温培养箱，恒温水浴锅，离心机，恒温干燥箱，Leica光学显微镜；RPMI1640培养基和秋水仙素(40？滋g/ml)(均购自广州拜迪生物技术有限责任公司)，胰酶(日本Sigma)，0.075mol/L氯化钾低渗溶液，新鲜配制的固定液(甲醇：冰醋酸=3：1)，磷酸盐缓冲液(pH7.4)，吉姆萨染液(购自湖南湘雅基因技术有限公司)。
1.3方法
1.3.1培养时间 吸取250？滋l静脉全血加入5ml培养基中，分别于当天10点和18点各接种2瓶(至加秋水仙素时的培养时间分别为70h和62h)。
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