脱细胞同种异体神经移植物组织相容性初探(2)
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参见附件。
1.3组织学观察ARSN与NRSN用10%福尔马林固定,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜观察。取两例ARSN用4%多聚甲醛和0.5%戊二醛混合固定液固定,锇酸后固定,制成扫描电镜样本,电镜观察。
1.4免疫组织化学法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法)检测LN和FNⅠ抗为兔抗鼠Fibronectin和Laminin抗体。PBS冲洗ARSN和NRSN,滴加3%的H2O2-甲醇15min。PBS 冲洗,滴加第一抗体,4℃过夜。第2d用PBS冲洗,加入第二抗体(生物素化羊抗鼠IgG),室温下1h。PBS冲洗2次,室温下加链霉素抗生素蛋白-过氧化物酶溶液1h。DAB染色,苏木素复染,脱水、透明、封片,光镜观察。
1.5 ARSN的肌肉埋植分别取ARSN和NRSN埋植于大鼠股四头肌内。术后分别于第4、7d取出埋植物,周围带少量肌肉组织。10%的福尔马林固定,常规石蜡包埋,横切片,HE染色,光镜观察。
2结果
2.1 ARSN与NRSN的组织结构差异HE染色光镜观察ARSN,可见横切面呈网状,髓鞘、轴突均已经消失,仅见雪旺细胞基底膜,未见雪旺细胞核,神经外膜、束膜内未见细胞结构(图1、2);纵切面可见基底膜呈典型的长空管状,雪旺细胞核、轴突和髓鞘均已消失,神经外膜、束膜中也未见细胞结构(图3、4)。扫描电镜观察,ARSN的轴突和髓鞘已经消失,仅可见空虚的基底膜管,与NRSN有明显的差异(图5,6)。
2.2免疫组织化学法检测LN和FN采用免疫组织化学法检测ARSN内的FN和LN,光镜观察可见基底膜管壁呈棕黄色、黄色的FN和LN阳性反应,说明脱细胞处理后,FN和LN的成分仍保留于基底膜管上,但与NRSN比较,阳性较弱,说明有少部分细胞外基质成分在脱细胞的过程中也被脱掉(图8-10) ......
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