自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡中的作用(1)

http://www.100md.com 2014年4月23日 戴海波 唐新桥

关键词：自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡中的作用,3-甲基腺嘌呤(3-MA),顺铂(DDP),骨肉瘤细胞

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     摘要：目的研究自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡中的作用及其意义。方法培养人骨肉瘤MG63细胞；运用MTT法检测自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导下对骨肉瘤MG63细胞的影响；MDC染色法及流式细胞仪检测自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导下对骨肉瘤MG63细胞的影响；流式细胞仪检测自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导下对骨肉瘤MG63细胞凋亡的变化。结果通过MTT法发现DDP可引起MG63细胞增殖率下降；与单独应用DDP组相比，3-MA+DDP组引起MG63细胞增殖率明显下降；MDC染色及流式细胞仪检测细胞自噬表达，发现与单独应用DDP组相比，3-MA+DDP组自噬表达水平下降；流式细胞术检测发现与单独应用DDP组相比，3-MA+DDP组细胞凋亡率明显增加。结论在自噬抑制剂3-MA的作用下，骨肉瘤MG63细胞自噬表达水平明显下降，从而促使DDP对骨肉瘤MG63细胞的细胞凋亡明显增加。

    关键词：自噬；凋亡；3-甲基腺嘌呤(3-MA)；顺铂(DDP)；骨肉瘤细胞

    1实验材料

    1.1细胞来源 骨肉瘤MG63细胞购于中科院上海细胞库。

    1.2主要试剂 3-甲基腺嘌呤(3-MA)、二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑盐(MTT)、单丹黄酰尸胺(MDC)购于美国Sigma公司。Annexin-FITC/PI凋亡试剂盒购于上海碧云天公司。

    1.3实验仪器 流式细胞仪(美国BD公司)、酶标仪(美国Thermo公司)、倒置荧光显微镜(德国LEICA公司)、低温高速旋转离心机(美国Beckman公司)、细胞培养孔板(美国NEST公司)。

    1.4试剂配制

    1.4.1 MDC溶液 将1 mg MDC粉末溶于1 mL无菌水中，可获得3 mmol/L的MDC溶液，取上述溶液100 μL加到6 mL无菌水中，获得实验用50 μmol/L的最终溶液，置于4℃冰箱避光保存备用。

    1.4.2 DDP溶液 取1 mL浓度为5 mg/mL的DDP ......

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