HPLC法测定归芪补血口服液中黄芪甲苷的含量
高效液相色谱法,提取随着我国医药事业的发展,在我国很多的常见药物中,有很多时具有营养机制和抗氧
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参见附件。
摘要:在临床中,通过等度洗脱的高效液相色谱法,对归芪补血口服液中所含的微量物质黄芪甲苷的含量进行测定,在测试中,经过对不同的样品进行检测和对比,确立起了最好的提取条件以及检测条件。这样的方法十分的简便容易操作,测量的精密度和准确度都是十分值得参考的,具有很好的稳定性,回收率也比较高,所以能够作为测定归芪补血口服液中黄芪甲苷提供方法的依据。
关键词:高效液相色谱法;归芪补血口服液;黄芪甲苷;提取随着我国医药事业的发展,在我国很多的常见药物中,有很多时具有营养机制和抗氧化价值的,其药理活性和药用价值都是十分值得研究的,这些药物在我们的实际生活中跟人体健康密切相关。黄芪中富含有很多的黄芪皂苷、黄酮等化合物,这些化合物自身有十分强的生物活性,归芪补血口服液能够用在治疗细胞免疫功能低下的慢性肝炎,也可以用于慢性活动性肝炎,在临床中治疗的效果十分的有效。不仅如此,归芪补血口服液还可以用来治疗白细胞减少症及和血小板减少性紫癜。在对蒙古黄芪中的皂苷类和黄酮类有效成分的相关的研究和探索中发现,皂苷类成分拥有14个共有峰,而黄酮类成分则具有12个共有峰[1-3],这些数据说明这些成分的化学成分是十分复杂的,那么对有效物质的提取和检测的要求就会变的很高。
1材料与仪器
试剂:95%乙醇;无水乙醇;氯仿;正丁醇;丙酮;无水乙醚;盐酸;碳酸钡;乙酸酐。上述所有的剂都是分析纯。仪器:UV-2401P紫外分光光度仪,TG328B光电分析天平;CKQ-250DE型数控超声波清洗器。Gilentlloo高效液相色谱仪;HH-S2系列恒温水浴锅;FTIR一8400S型红外光谱仪;GSP-84-02型磁力恒温搅拌器,上述仪器都是由岛津公司生产。
2检测的方法与取得的结果
2.1对黄芪甲苷的提取归芪补血口服液50ml加入6倍体积量(V/V)的60%乙醇,NaOH饱和溶液调节pH至12,温度:调节至60°,通过加热回流提取2次,最终得到提取液200ml,之后通过减压浓缩获取到浓缩液约100ml。通过重复的浓缩液萃取,最终得到黄芪甲苷粗品约25.0mg,通过HPLC检测纯度超过80%。之后再次进行反相硅胶C-18常压色谱柱分离,并通过60%甲醇洗脱,最终获得黄芪甲苷纯品约13.5mg,在实际的检测中HPLC检测纯度符合药典标准。详细的数据可以参照具体HPLC图与主峰含量,附件为图1与表1。经过扫描的结果显示,黄芪甲苷在325nm处显示出的波长处吸收最强,这时其灵敏度较高。将峰面积积分值为纵坐标,而将对照品浓度为横坐标,以横纵坐标为标准,绘制标准曲线。得到回归方程:黄芪甲苷Y=13.614X-1.4897,r=0.9999。线性范围为10.2-102ug/mL。
图1黄芪甲苷纯品HPLC色谱图
2.2相关样本的准备工作在检测中,把3份样品放置在20ml的容量瓶中,这三份样品具有不同的生产日期,并且都经过了抽提,将提取液大约15ml浸泡 ......
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