冬凌草甲素对NCI-H460肺癌细胞凋亡相关蛋白的影响
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肺癌在我国已经成为癌症死亡的首要病因。冬凌草甲素是从冬凌草中提取出来的天然化合物，其分子式为C12H28O6，具有抗肿瘤活性，能诱导多种肿瘤细胞凋亡[1]。本文旨在探讨冬凌草甲素促进肺癌细胞凋亡的作用机制，为肺癌的治疗提供理论依据。
1资料
肺癌细胞株NCI-H460细胞购自中国科学院细胞研究所。冬凌草甲素(纯度≥98%)购自上海诗丹德生物技术有限公司。RPMI 1640购自Gibco公司；噻唑蓝(Thiazolyl blue tetrazolium bromide，MTT)及二甲基亚砜购自Sigma公司；兔抗鼠IgG抗体及鼠抗人β-actin、livin、survivin抗体购自Santa Cruz公司；Western-blot Luminol(ECL)试剂盒购自Santa Cruz公司。
2方法
2.1细胞培养NCI-H460肺癌细胞接种于含10%小牛血清的RPMI 1640培养基中，于37℃、体积分数5%CO2的培养箱中培养。取对数生长期的细胞进行实验，分为对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组，分布加入冬凌草甲素使终浓度为0、8、16、24μmol/L。
2.2凋亡细胞的形态学观察采用Hoechst33342/PI荧光双重染色。培养细胞中加入Hoechst33342，终浓度为5μg/ml，37℃避光染色10min，加入PI染液，终浓度为15μg/ml，4℃避光反应10min，荧光显微镜下观察。
2.3流式细胞仪检测细胞凋亡收集1×105个细胞，用冷PBS洗涤细胞两次，细胞重悬后Hoechst33342/PI染色，1h内用流式细胞仪检测凋亡。其中活细胞仅有很低的荧光强度，凋亡细胞有较强的绿色荧光，坏死细胞有绿色和红色荧光双重染色。
2.4 Western blot检测livin、survivin表达收集4组细胞 ......
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