宫颈鳞癌中RhoA及CD34的表达及临床意义(2)
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宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，每年新增宫颈癌患者80%发生于发展中国家[1]，目前其发病还有年轻化趋势[2]。宫颈癌的主要特点是侵袭转移，这也是导致宫颈癌患者死亡的主要原因。近年研究发现一些与宫颈癌侵袭转移相关的基因如Rho[3-4]等在肿瘤的侵袭和转移中发挥了重要作用。本研究采用免疫组化SP法检测RhoA和CD34在宫颈癌组织中的表达情况，探讨RhoA表达改变及微血管密度与宫颈癌侵袭转移的关系。
1资料与方法
1.1一般资料 标本取自2010年1月～2012年12月在我院妇科手术切除宫颈病理组织标本，其中宫颈上皮内瘤变组织20例；宫颈鳞癌标本50例(淋巴结有转移者16例，淋巴结无转移者34例)；鳞癌组织学分级：G1 27例，G2 13例，G3 10例；FIGO分期：Ⅰ期31例，Ⅱ期19例。随机选择16例同期因子宫肌瘤行全子宫切除的正常宫颈标本作对照。患者年龄27～65岁，中位年龄43.4岁。全部病例术前均未接受放疗、化疗。
1.2主要实验试剂 兔抗人RhoA多克隆抗体，鼠抗人CD34单克隆抗体、链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)免疫组化染色试剂盒均购自北京中山金桥生物技术有限公司。
1.3方法 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(Streptavidin-peroxidease， SP)免疫组化技术。所有新鲜标本均用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，选择典型病灶连续切片，片厚4 μm，做免疫组化染色。SP法检测不同宫颈组织中RhoA和CD34的表达情况。以PBS代替一抗作为阴性对照，用公司提供的阳性切片作为阳性对照。
1.4阳性结果判定标准
1.4.1 RhoA染色结果判定标准 RhoA免疫组织化学显色为棕黄色颗粒，分布于肿瘤细胞的细胞质。评分标准按Martin-Villar[5]等的方法，根据染色强度及阳性细胞百分率进行评分 ......
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