多重耐药铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子基因盒的检测与耐药机制研究
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摘要：目的 通过检测I类整合子基因盒在多重耐药铜绿假单胞菌(PA)中的分布情况以及基因结构，研究其与细菌多重耐药的相关性。方法 筛选出临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌60株作为研究对象，利用聚合酶链反应(PCR)法检测其中的I类整合子，并进一步应用PCR法扩增I类整合子检测阳性株耐药基因盒，并应用测序对其所携带的耐药基因进行分析。结果 Ⅰ类整合子在多重耐药铜绿假单胞菌中检出25株阳性株，检测阳性率为41.7%，经PCR进一步扩增所得I类整合子基因盒中发现5个730-2550bp大小的不同基因片段，主要包括氨基糖苷类抗生素抗性基因(包括aadA2、aadA2、aadB腺苷酰基转移酶、aac-6II乙酰基转移酶)，编码PSE-1蛋白PSE-1基因，dfrA1二氢叶酸还原酶基因。结论 I类整合子在多重耐药铜绿假单胞茵中检出阳性率较高，并携带有多种耐药基因盒，提示铜绿假单胞茵多重耐药性与I类整合子密切相关。
关键词：铜绿假单胞茵；多重耐药；I类整合子；基因盒
铜绿假单胞菌(PA)广泛分布于医院环境中，是院内感染的重要条件致病菌，具有多重耐药性，且易变异、定植，在世界范围内所有院内感染细菌中，PA占10%～15%[1]。近年来随着广谱抗生素的滥用，PA耐药性也逐渐提高，在临床各种感染性疾病中具有较高的检出率，尤其是全耐药(PDR)、泛耐药(XDR)、多重耐药(MDR)菌株的不断涌现，如何治疗PA感染问题已经成为临床治疗的重要课题[2]。在抗生素抗性基因水平转移中最为重要的部分为细菌整合子，其可经其位点特异整合系统识别、捕获各种耐药抗性基因盒，将其整合并表达，从而导致多重耐药产生。为进一步探讨I类整合子与PA多重耐药性的相关性，本文检测了临床分离的多重耐药PA菌株60株中I类整合子的分布情况，并扩增了其中的阳性检测菌株进行测序分析，先将具体分析进行如下报道。
1 材料与方法
1.1菌株以及药敏试验 60株多重耐药铜绿假单胞菌均来自我院住院患者的非重复临床标本分离所得，对所有收集的菌株的检测、鉴定均采用VITEK Compact全自动鉴定系统，及其所配套的GN卡。在卫生部临床检验中心购置ATCC27853铜绿假单胞菌以及ATCC25922大肠埃希菌作为质控菌株。多重耐药铜绿单胞菌对12种抗生素敏感性采用K-B法(由CLSI推荐)进行测定，以2013年制定的CLSI标准判断药敏试验的结果。
1.2 细菌DNA模板提取 细菌NDA模板主要采用细菌基因组DNA提取试剂盒(上海英骏生物技术公司)提取 ......
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