1.2.6荧光素酶报告基因质粒的构建和检测 设计荧光素酶报告基因质粒的引物为，用高保真酶FastPfu DNA Polymerase 进行PCR，PCR产物经胶回收、酶切、连接后转化进行菌落

    鉴定和质粒提取，最后测序进行验证后得到目的质粒。将Hep-2细胞接种至24孔板，每孔8×104个细胞，将miR-30d mimics、miR-NC mimics、报告基因质粒和PGL4.74质粒转染至细胞内，24h后使用Dual-Luciferase Reporter Assay 试剂盒分析检测。

    1.2.7统计学分析 数据经过至少3次独立实验取平均值进行分析，并进行t检验，采用方差分析，P<0.05为显著性差异。

    2 结果

    2.1 miR-30d在喉癌组织中低表达 使用实时荧光定量PCR法对38例喉癌组织和19例正常喉组织中miR-30d的表达量进行检测，发现与正常喉组织相比喉癌组织中miR-30d表达量明显下调(图1 A ......