电针对L—DOPA诱发异动症大鼠模型成功率的影响(1)
摘要：目的 探讨电针刺激对左旋多巴(L-DOPA)诱导帕金森病大鼠异动症模型制作成功率的影响。方法 6-OHDA立体定向注射制备偏侧PD大鼠模型，将成功模型随机分成单纯诱导组和电针干预诱导组。单纯诱导组给予L-DOPA腹腔注射，2次/d，电针干预诱导组除同等方法药物注射外每日进行电针治疗，21d后，统计各组成功模型，计算异动症模型成功率，把两组进行比较。结果 经卡方检验P<0.05干预诱导组显著低于单纯诱导组。结论 电针刺激可以明显抑制L-DOPA诱导PD大属出现异动症，针刺配合药物治疗帕金森有利于控制药物性异动症在动物身上找到了实验依据。
关键词：电针；PD L-DOPA；异动症；成功率
帕金森病(PD)是以黑质多巴胺能(DA)神经元病变为主要病理特征的常见的中老年神经系统疾病，表现为身体活动缓慢、肌张力增高、静止性震颤等症状，严重影响患者活动能力。目前临床治疗以多巴胺替代疗法为主要治疗措施，L-DOPA被认为是PD对症治疗中最有效的药物，但长期应用可引起异动症和运动波动等并发症，有资料指出L-DOPA治疗5～10年后，50%左右的帕金森病患者会出现左旋多巴诱发的异动症(LD)，严重者可因此致残[1]。近几年针药联合治疗帕金森病取得了较好的疗效，然而针灸联合L-DOPA治疗帕金森病对于异动症的作用却鲜有报道。
1资料与方法
1.1动物、药剂和主要仪器 2～3月龄雄性SD大鼠(清洁级)70只，体重250～300g(由滨州医学院实验动物中心提供)；10%水合氯醛、6-OHDA、阿朴吗啡、L-DOPA，苄丝肼，0.2%Vc生理盐水；大鼠脑立体定向仪(Narishige)，G6805电针仪，34号毫针若干。
1.2 PD大鼠模型制备 对大鼠进行旋转行为检测，确认无异常后用10%水合氯醛对大鼠行腹腔注射(0.4ml/100g)，将大鼠麻醉后平颅位固定于大鼠脑立体定向仪上。依次备皮、消毒、切开颅顶皮肤、剥离骨膜，参照包新民所著大鼠脑立体定向图谱确定右侧前脑内侧束(MFB)坐标。a点：前囟尾侧4.5mm，中线右侧1.9mm，硬膜下7.4mm；b点：前囟尾侧5.0mm，中线右侧2.3mm，硬膜下7.4mm)。将20μg 6-OHDA立体定向注射于a、b两个靶点，每点注射量10μg(将20μg6-OHDA溶解于0.2%Vc生理盐水中制成3μg/μl溶液，注射速度1μl/min).每点注射完留针10min，缓慢退针，缝合皮肤。3w后对大鼠行阿朴吗啡腹腔注射(0.5mg/kg)诱导其向对侧旋转，10min后观察并记录旋转次数30min，标记平均频率大于7圈/min的大鼠，共38只，为成功的PD大鼠模型。
1.3 PD大鼠模型分组 将38只PD大鼠随机分为单纯诱导组(19只)和电针干预诱导组(19只)。
1.4异动症模型的制备 对单纯诱导组19只大鼠分别给予L-DOPA(5mgL-DOPA和1.25mg苄丝肼溶于0.2%Vc生理盐水1ml)0.5mg/100g腹腔注射，2次/d，连续用药21d。对电针干预诱导组19只大鼠在每日按同样方法分别给同等剂量的L-DOPA处理之前，先给予大鼠电针刺激"百会"、"太阳"、"风池""风府""阳凌泉""太冲""及舞蹈震颤控制区"(穴位根据《实验针灸学》上海科技出版社，1992年)干预。电针频率100HZ，强度1mA，留针30min，1次/d，连续治疗21d。
2结果
2.1异动症大鼠的判定标准 参考Lunbdlad[2]和Lee[3]的AM评分中的四个部分的不自主运动来确定本实验中大鼠是否出现异动症，包括①口颌部：下颌不自主咀嚼，舌偏向左侧。②轴部：颈部和背部向左侧扭动。③肢体部：左侧上肢或脚趾不自主运动。④运动部：向对侧偏斜及转转。从分组治疗的第18日到第21日每次左旋多巴注射后观察180min，实验大鼠出现以上四部分一个及一个以上出现一次以上异常都判定为异动症。
2.2观察结果 经过反复观看录像，统计诱导结果，见表1。
经卡方检验，P<0.05有统计学意义，电针刺激诱L-DOPA诱导的PD大鼠模型可以降低异动症的发生率。
3讨论
目前，普遍认为长期L-DOPA波动性刺可导致LD，但其发病机制仍不十分明确。有研究发现只有当大鼠黑质或纹状体多巴胺能(DA)神经元损伤大于80%时才会出现AM[4]，可见AM的发生与DA能神经元损伤有关，而同时有一系列研究发现高频电针能有效防止PD大鼠黑质多巴胺能神经元损伤，主要表现为增加多巴胺神经元数目[5]、缓解多巴胺神经元的退变[6-8]、甚至可能诱发多巴胺神经干细胞的增殖、分化[9]和抑制多巴胺神经元凋亡的作用[10]；应用L-DOPA可导致基底神经节中GABA能神经传递的改变，黑质和苍白球中的多巴胺D1受体活化可通过促进GABA释放而促进神经元发放某种电冲动，而进一步研究发现，此种电冲动跟异动症密相关[11，12]因而GABA改变可能在传出层面上与异动症相关。同时有研究指出电针刺激PD大鼠对GABA有复杂影响[13]；又有研究发现，异动症猴子纹状体内α-氨基-3羟基-5甲基-4异恶唑(AMPA)受体和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体结构发生了变化，通过药物阻滞两种受体活性可通过减少谷氨酸神经元的传入而减轻异动症，说明谷氨酸神经递质的过度活化与异动症有关[14，15]，而又有研究表明电针刺激大鼠可以引起其纹状体内谷氨酸的释放减少[16]。电针可能是基于以上机制抑制了异动症的发生。本实验是在其应用方面的探讨。用电针干预左旋多巴诱导异动症大鼠的过程就是模拟了电针联合L-DOPA治疗大鼠帕金森的过程。L-DOPA诱导大鼠出现的AM与PD患者LD在分子机制、病理学特征等方面极具相似性，可作为研究人类LD动物模型用于LD研究[17]，因此，此研究对于本实验进一步在临床阶段的探索提供了理论支撑。, 百拇医药(金涛)
关键词：电针；PD L-DOPA；异动症；成功率
帕金森病(PD)是以黑质多巴胺能(DA)神经元病变为主要病理特征的常见的中老年神经系统疾病，表现为身体活动缓慢、肌张力增高、静止性震颤等症状，严重影响患者活动能力。目前临床治疗以多巴胺替代疗法为主要治疗措施，L-DOPA被认为是PD对症治疗中最有效的药物，但长期应用可引起异动症和运动波动等并发症，有资料指出L-DOPA治疗5～10年后，50%左右的帕金森病患者会出现左旋多巴诱发的异动症(LD)，严重者可因此致残[1]。近几年针药联合治疗帕金森病取得了较好的疗效，然而针灸联合L-DOPA治疗帕金森病对于异动症的作用却鲜有报道。
1资料与方法
1.1动物、药剂和主要仪器 2～3月龄雄性SD大鼠(清洁级)70只，体重250～300g(由滨州医学院实验动物中心提供)；10%水合氯醛、6-OHDA、阿朴吗啡、L-DOPA，苄丝肼，0.2%Vc生理盐水；大鼠脑立体定向仪(Narishige)，G6805电针仪，34号毫针若干。
1.2 PD大鼠模型制备 对大鼠进行旋转行为检测，确认无异常后用10%水合氯醛对大鼠行腹腔注射(0.4ml/100g)，将大鼠麻醉后平颅位固定于大鼠脑立体定向仪上。依次备皮、消毒、切开颅顶皮肤、剥离骨膜，参照包新民所著大鼠脑立体定向图谱确定右侧前脑内侧束(MFB)坐标。a点：前囟尾侧4.5mm，中线右侧1.9mm，硬膜下7.4mm；b点：前囟尾侧5.0mm，中线右侧2.3mm，硬膜下7.4mm)。将20μg 6-OHDA立体定向注射于a、b两个靶点，每点注射量10μg(将20μg6-OHDA溶解于0.2%Vc生理盐水中制成3μg/μl溶液，注射速度1μl/min).每点注射完留针10min，缓慢退针，缝合皮肤。3w后对大鼠行阿朴吗啡腹腔注射(0.5mg/kg)诱导其向对侧旋转，10min后观察并记录旋转次数30min，标记平均频率大于7圈/min的大鼠，共38只，为成功的PD大鼠模型。
1.3 PD大鼠模型分组 将38只PD大鼠随机分为单纯诱导组(19只)和电针干预诱导组(19只)。
1.4异动症模型的制备 对单纯诱导组19只大鼠分别给予L-DOPA(5mgL-DOPA和1.25mg苄丝肼溶于0.2%Vc生理盐水1ml)0.5mg/100g腹腔注射，2次/d，连续用药21d。对电针干预诱导组19只大鼠在每日按同样方法分别给同等剂量的L-DOPA处理之前，先给予大鼠电针刺激"百会"、"太阳"、"风池""风府""阳凌泉""太冲""及舞蹈震颤控制区"(穴位根据《实验针灸学》上海科技出版社，1992年)干预。电针频率100HZ，强度1mA，留针30min，1次/d，连续治疗21d。
2结果
2.1异动症大鼠的判定标准 参考Lunbdlad[2]和Lee[3]的AM评分中的四个部分的不自主运动来确定本实验中大鼠是否出现异动症，包括①口颌部：下颌不自主咀嚼，舌偏向左侧。②轴部：颈部和背部向左侧扭动。③肢体部：左侧上肢或脚趾不自主运动。④运动部：向对侧偏斜及转转。从分组治疗的第18日到第21日每次左旋多巴注射后观察180min，实验大鼠出现以上四部分一个及一个以上出现一次以上异常都判定为异动症。
2.2观察结果 经过反复观看录像，统计诱导结果，见表1。
经卡方检验，P<0.05有统计学意义，电针刺激诱L-DOPA诱导的PD大鼠模型可以降低异动症的发生率。
3讨论
目前，普遍认为长期L-DOPA波动性刺可导致LD，但其发病机制仍不十分明确。有研究发现只有当大鼠黑质或纹状体多巴胺能(DA)神经元损伤大于80%时才会出现AM[4]，可见AM的发生与DA能神经元损伤有关，而同时有一系列研究发现高频电针能有效防止PD大鼠黑质多巴胺能神经元损伤，主要表现为增加多巴胺神经元数目[5]、缓解多巴胺神经元的退变[6-8]、甚至可能诱发多巴胺神经干细胞的增殖、分化[9]和抑制多巴胺神经元凋亡的作用[10]；应用L-DOPA可导致基底神经节中GABA能神经传递的改变，黑质和苍白球中的多巴胺D1受体活化可通过促进GABA释放而促进神经元发放某种电冲动，而进一步研究发现，此种电冲动跟异动症密相关[11，12]因而GABA改变可能在传出层面上与异动症相关。同时有研究指出电针刺激PD大鼠对GABA有复杂影响[13]；又有研究发现，异动症猴子纹状体内α-氨基-3羟基-5甲基-4异恶唑(AMPA)受体和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体结构发生了变化，通过药物阻滞两种受体活性可通过减少谷氨酸神经元的传入而减轻异动症，说明谷氨酸神经递质的过度活化与异动症有关[14，15]，而又有研究表明电针刺激大鼠可以引起其纹状体内谷氨酸的释放减少[16]。电针可能是基于以上机制抑制了异动症的发生。本实验是在其应用方面的探讨。用电针干预左旋多巴诱导异动症大鼠的过程就是模拟了电针联合L-DOPA治疗大鼠帕金森的过程。L-DOPA诱导大鼠出现的AM与PD患者LD在分子机制、病理学特征等方面极具相似性，可作为研究人类LD动物模型用于LD研究[17]，因此，此研究对于本实验进一步在临床阶段的探索提供了理论支撑。, 百拇医药(金涛)