广西金花茶水提取物对小鼠皮肤光老化防护作用的实验研究
摘要：目的 研究金花茶提取物对光老化模型小鼠皮肤的保护作用。方法 用紫外光灯照射KM小鼠，建立光老化小鼠模型，灌胃给予金花茶提取物，观察小鼠皮肤的组织形态，测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶、丙二醛及羟脯氨酸的含量。结果 各剂量金花茶提取物均能有效提高光老化小鼠皮肤中SOD活力(P<0.05)、降低MDA含量(P<0.05)、增加羟脯氨酸含量(P<0.05)，且能显著减轻小鼠皮肤组织受损程度。结论 金花茶提取物具有抗皮肤光老化的作用，且大剂量优于小剂量，作用机制可能与其能够清除自由基和活性氧，从而防止组织过氧化损伤有关。
关键词：金花茶；光老化；皮肤
皮肤是机体最大的器官，与许多皮肤病如脂溢性角化、日光性角化、基底细胞癌、鳞状细胞癌等的发生也有着病因学的关系，而且有损于美容。皮肤老化包括两个过程，内在老化和光老化，其中光老化主要由长期紫外线照射所致，只能通过避免阳光照射和使用防晒药物来预防。金花茶属山茶科山茶属植物，是世界珍贵的药用资源，含有多种茶多酚、茶多糖、黄酮类以及微量元素等人体所需的有益成分[1]。此外，金花茶是广西特有的植物资源，其水浸出物具有明显的降血压、降血脂和防止动脉粥样硬化、提高机体免疫能力、抗氧化等多种功能[2]。本文通过给小白鼠灌胃给予低、高剂量金花茶提取物，观察小鼠皮肤的组织形态，测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及羟脯氨酸(Hpy)的含量，以深研究金花茶防治皮肤光老化作用。现将实验结果报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料 3月龄昆明种小鼠50只。雌雄各50%，体重(20±2)g，由右江民族医学院动物中心提供(许可证号：SYXK桂2011-0010)。
1.2药物及试剂 将金花茶生品用干燥箱烘干24 h，高速粉碎机粉碎后，过120目筛，制备成极细的中药粉末，配制成浓度分别为8%、16%的金花茶提取液，置于4℃冰箱中备用。维生素E(浙江医药股份有限公司)、维生素C(湖北华中制药公司)配成1%的混悬液，冷藏备用。
1.3方法
1.3.1分组 将小鼠正常喂养1 w后，随机分为5组：空白组、模型组、维生素E-C合剂组(以下简称西药组)、金花茶大剂量组(以下简称大剂量组)、金花茶小剂量组(以下简称小剂量组)，每组10只。分笼喂养，自由饮食。
1.3.2造模 各组小鼠称重，做标记，全价饲料适应性喂养1 w。除空白组外其余各组小鼠每天或每2 d用动物剃毛剪将背部毛脱干净，面积2 cm×2 cm。将小鼠置于紫外光灯下(UVA+UVB，模拟日光)照射，照射距离40 cm。照射15 min/d，连续照射20 d，达到累计照射剂量UVA为20.6 mJ/cm2、UVB为1.8 mJ/cm2，造模完成。
1.3.3给药 空白组：正常饲养；蒸馏水灌胃组：模型组：造模+每天灌胃蒸馏水；大剂量组：造模+按3.2 mg/g/d体重的剂量灌胃；小剂量组：造模+按0.8mg/g/d体重的剂量灌胃；西药组：造模+每日灌胃维生素E-C悬液(50 mg/kg)，连续6 w。
1.3.4指标观察 第56d末次给药前禁食12 h，给药1 h后，小鼠背部脱毛，肉眼观察皮肤组织形态改变，取背部正中皮肤约1 mm×1 mm大小的皮肤组织，进行指标检测。
1.4统计学处理 所有数据均通过SPSS 18.0软件完成数据分析，计算资料以(x±s)表示，各组间均值比较采用t检验，P<0.05有统计学意义。
2结果
2.1皮肤一般形态 与空白组相比，模型组小鼠背侧表皮颜色加深、增厚、脱屑，严重者出现皱缩、粗糙变硬；西药组及大剂量组、小剂量组小鼠背侧表皮仅有稍许皮肤增厚，无脱屑、颜色加深。
2.2小鼠皮肤中SOD活力、MDA含量、HPy含量：经紫外照射后小鼠皮肤组织丙二醛含量明显增加，羟脯氨酸含量下降，SOD活性降低，与空白对照组各指标变化比较差异有显著性意义(P<0.01)。灌服金花茶水提取液后，小鼠皮肤中SOD活力明显升高，丙二醛含量显著降低，差异均有显著性意义(P<0.05)，提示金花茶可增强皮肤对自由基的防护功能，减少脂质过氧化产物堆积。灌服金花茶后，小，大剂量组小鼠皮肤羟脯氨酸含量提高，提示内服金花茶可促进皮肤胶原蛋白的合成，减少紫外线对皮肤胶原蛋白的影响，见表1。
3讨论
皮肤衰老是在增龄过程中所出现的特殊皮肤的外貌，是由于机体在生理和病理性衰老过程中引起的表皮、真皮和皮下组织以及皮肤附属器官的改变并同时受激素、日光辐射，化学及营养缺陷等诸多因素积累性、多方位性作用的结果[3]。①非暴露的皮肤变薄，而暴露的部分由于长期的慢性日光照射还会引起皮肤微循环的改变，使皮肤无光泽，有时还可能出现良性及恶性肿瘤。局部的皮肤可出现色素沉着和一些皮肤病，如老年斑。②在皮肤的组织、结构和生理生化方面发生改变；③皮肤的一些感觉，保护、调节体温、防御、吸收、分泌和排泄，呼吸。免疫、代谢等一些生理功能也相应地发生变化。
近年来，国内外应用多种不同中药或其提取物对皮肤光老化的防治取得了颇有成效的研究[4]。韦霄等[5]研究发现金花茶提取液具有良好的抗氧化活性，且呈量效关系。金花茶属山茶科山茶属植物，是世界珍贵的药用资源，含有多种茶多酚、茶多糖、黄酮类以及微量元素等人体所需的有益成分。现代研究表明实茶多酚、茶色素均具有抗氧化作用。
本实验采用复合光源(UVA+UVB)模拟日光，更符合自然条件，长时间中小剂量紫外线照射皮肤，可最大程度地模拟皮肤光老化的生理过程，实验结果表明模型组皮肤组织丙二醛含量明显增加，羟脯氨酸含量下降，SOD活性降低，与空白对照组各指标变化比较差异有显著性意义(P<0.01)，由此可见模拟紫外光照射小鼠皮肤光老化模型建立成功。实验结果显示，灌服金花茶水提取液后，小鼠皮肤中SOD活力明显升高，丙二醛含量显著降低，差异均有显著性意义(P<0.05)，提示金花茶可增强皮肤对自由基的防护功能，减少脂质过氧化产物堆积。但对于不同的剂量金花茶水提取物的作用有一定差距，可能是存在一个对于皮肤治疗有一个最佳药量不同，所以大剂量组的效果高于小剂量组。实验结果显示灌服金花茶后，各剂量组小鼠皮肤羟脯氨酸含量提高，羟脯氨酸(Hpy)是真皮内含量丰富而且性质比较稳定的氨基酸，它的含量可以间接反映出真皮内胶原蛋白(胶原蛋白是胶原纤维的主要成分)的含量变化。因此，Hpy的含量的变化可以提示皮肤老化的程度。实验结果提示内服金花茶可以抑制小白鼠皮肤中羟脯氨酸含量的降低，抑制胶原蛋白分子之间的关联，从而修复胶原、延缓皮肤衰老的作用。说明金花茶水提取物中某种生物活性物质在参与清除自由基。
本实验从抗氧化角度探讨了金花茶水提取物对皮肤光老化模型小鼠皮肤清除自由基的作用机制，实验结果表明，金花茶水提取物能防治紫外线照射引起的皮肤光老化，其机制可能与通过提高光老化皮肤抗氧化酶活性，改变氧化产物的含量相关。
参考文献：
[1]广西植物研究所.广西植物志[M].南宁：广西科技出版社，1965：780-785.
[2]王妙云化工设备产品开发管理与远程故障诊断研究及应用[D].武汉：华中科技大学，2009.
[3]潘天鹏.现代系统老年医学[M].北京：科学出版社，1998：200.
[4]陈绍斐，马丽俐.中药对皮肤光老化防治作用的研究进展[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2008，7(1)：57-60.
[5]韦霄，黄兴贤，蒋运生，等.3种金花茶组植物提取物的抗氧化活性比较[J].中国中药杂志，2011，36(5)：639.编辑/肖慧, http://www.100md.com(王桥妹)
关键词：金花茶；光老化；皮肤
皮肤是机体最大的器官，与许多皮肤病如脂溢性角化、日光性角化、基底细胞癌、鳞状细胞癌等的发生也有着病因学的关系，而且有损于美容。皮肤老化包括两个过程，内在老化和光老化，其中光老化主要由长期紫外线照射所致，只能通过避免阳光照射和使用防晒药物来预防。金花茶属山茶科山茶属植物，是世界珍贵的药用资源，含有多种茶多酚、茶多糖、黄酮类以及微量元素等人体所需的有益成分[1]。此外，金花茶是广西特有的植物资源，其水浸出物具有明显的降血压、降血脂和防止动脉粥样硬化、提高机体免疫能力、抗氧化等多种功能[2]。本文通过给小白鼠灌胃给予低、高剂量金花茶提取物，观察小鼠皮肤的组织形态，测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及羟脯氨酸(Hpy)的含量，以深研究金花茶防治皮肤光老化作用。现将实验结果报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料 3月龄昆明种小鼠50只。雌雄各50%，体重(20±2)g，由右江民族医学院动物中心提供(许可证号：SYXK桂2011-0010)。
1.2药物及试剂 将金花茶生品用干燥箱烘干24 h，高速粉碎机粉碎后，过120目筛，制备成极细的中药粉末，配制成浓度分别为8%、16%的金花茶提取液，置于4℃冰箱中备用。维生素E(浙江医药股份有限公司)、维生素C(湖北华中制药公司)配成1%的混悬液，冷藏备用。
1.3方法
1.3.1分组 将小鼠正常喂养1 w后，随机分为5组：空白组、模型组、维生素E-C合剂组(以下简称西药组)、金花茶大剂量组(以下简称大剂量组)、金花茶小剂量组(以下简称小剂量组)，每组10只。分笼喂养，自由饮食。
1.3.2造模 各组小鼠称重，做标记，全价饲料适应性喂养1 w。除空白组外其余各组小鼠每天或每2 d用动物剃毛剪将背部毛脱干净，面积2 cm×2 cm。将小鼠置于紫外光灯下(UVA+UVB，模拟日光)照射，照射距离40 cm。照射15 min/d，连续照射20 d，达到累计照射剂量UVA为20.6 mJ/cm2、UVB为1.8 mJ/cm2，造模完成。
1.3.3给药 空白组：正常饲养；蒸馏水灌胃组：模型组：造模+每天灌胃蒸馏水；大剂量组：造模+按3.2 mg/g/d体重的剂量灌胃；小剂量组：造模+按0.8mg/g/d体重的剂量灌胃；西药组：造模+每日灌胃维生素E-C悬液(50 mg/kg)，连续6 w。
1.3.4指标观察 第56d末次给药前禁食12 h，给药1 h后，小鼠背部脱毛，肉眼观察皮肤组织形态改变，取背部正中皮肤约1 mm×1 mm大小的皮肤组织，进行指标检测。
1.4统计学处理 所有数据均通过SPSS 18.0软件完成数据分析，计算资料以(x±s)表示，各组间均值比较采用t检验，P<0.05有统计学意义。
2结果
2.1皮肤一般形态 与空白组相比，模型组小鼠背侧表皮颜色加深、增厚、脱屑，严重者出现皱缩、粗糙变硬；西药组及大剂量组、小剂量组小鼠背侧表皮仅有稍许皮肤增厚，无脱屑、颜色加深。
2.2小鼠皮肤中SOD活力、MDA含量、HPy含量：经紫外照射后小鼠皮肤组织丙二醛含量明显增加，羟脯氨酸含量下降，SOD活性降低，与空白对照组各指标变化比较差异有显著性意义(P<0.01)。灌服金花茶水提取液后，小鼠皮肤中SOD活力明显升高，丙二醛含量显著降低，差异均有显著性意义(P<0.05)，提示金花茶可增强皮肤对自由基的防护功能，减少脂质过氧化产物堆积。灌服金花茶后，小，大剂量组小鼠皮肤羟脯氨酸含量提高，提示内服金花茶可促进皮肤胶原蛋白的合成，减少紫外线对皮肤胶原蛋白的影响，见表1。
3讨论
皮肤衰老是在增龄过程中所出现的特殊皮肤的外貌，是由于机体在生理和病理性衰老过程中引起的表皮、真皮和皮下组织以及皮肤附属器官的改变并同时受激素、日光辐射，化学及营养缺陷等诸多因素积累性、多方位性作用的结果[3]。①非暴露的皮肤变薄，而暴露的部分由于长期的慢性日光照射还会引起皮肤微循环的改变，使皮肤无光泽，有时还可能出现良性及恶性肿瘤。局部的皮肤可出现色素沉着和一些皮肤病，如老年斑。②在皮肤的组织、结构和生理生化方面发生改变；③皮肤的一些感觉，保护、调节体温、防御、吸收、分泌和排泄，呼吸。免疫、代谢等一些生理功能也相应地发生变化。
近年来，国内外应用多种不同中药或其提取物对皮肤光老化的防治取得了颇有成效的研究[4]。韦霄等[5]研究发现金花茶提取液具有良好的抗氧化活性，且呈量效关系。金花茶属山茶科山茶属植物，是世界珍贵的药用资源，含有多种茶多酚、茶多糖、黄酮类以及微量元素等人体所需的有益成分。现代研究表明实茶多酚、茶色素均具有抗氧化作用。
本实验采用复合光源(UVA+UVB)模拟日光，更符合自然条件，长时间中小剂量紫外线照射皮肤，可最大程度地模拟皮肤光老化的生理过程，实验结果表明模型组皮肤组织丙二醛含量明显增加，羟脯氨酸含量下降，SOD活性降低，与空白对照组各指标变化比较差异有显著性意义(P<0.01)，由此可见模拟紫外光照射小鼠皮肤光老化模型建立成功。实验结果显示，灌服金花茶水提取液后，小鼠皮肤中SOD活力明显升高，丙二醛含量显著降低，差异均有显著性意义(P<0.05)，提示金花茶可增强皮肤对自由基的防护功能，减少脂质过氧化产物堆积。但对于不同的剂量金花茶水提取物的作用有一定差距，可能是存在一个对于皮肤治疗有一个最佳药量不同，所以大剂量组的效果高于小剂量组。实验结果显示灌服金花茶后，各剂量组小鼠皮肤羟脯氨酸含量提高，羟脯氨酸(Hpy)是真皮内含量丰富而且性质比较稳定的氨基酸，它的含量可以间接反映出真皮内胶原蛋白(胶原蛋白是胶原纤维的主要成分)的含量变化。因此，Hpy的含量的变化可以提示皮肤老化的程度。实验结果提示内服金花茶可以抑制小白鼠皮肤中羟脯氨酸含量的降低，抑制胶原蛋白分子之间的关联，从而修复胶原、延缓皮肤衰老的作用。说明金花茶水提取物中某种生物活性物质在参与清除自由基。
本实验从抗氧化角度探讨了金花茶水提取物对皮肤光老化模型小鼠皮肤清除自由基的作用机制，实验结果表明，金花茶水提取物能防治紫外线照射引起的皮肤光老化，其机制可能与通过提高光老化皮肤抗氧化酶活性，改变氧化产物的含量相关。
参考文献：
[1]广西植物研究所.广西植物志[M].南宁：广西科技出版社，1965：780-785.
[2]王妙云化工设备产品开发管理与远程故障诊断研究及应用[D].武汉：华中科技大学，2009.
[3]潘天鹏.现代系统老年医学[M].北京：科学出版社，1998：200.
[4]陈绍斐，马丽俐.中药对皮肤光老化防治作用的研究进展[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2008，7(1)：57-60.
[5]韦霄，黄兴贤，蒋运生，等.3种金花茶组植物提取物的抗氧化活性比较[J].中国中药杂志，2011，36(5)：639.编辑/肖慧, http://www.100md.com(王桥妹)