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编号:13639197
CD146在人骨肉瘤患者组织中的表达及其临床意义(2)
http://www.100md.com 2015年7月9日 《医学信息》 201527
     1.3实验方法

    1.3.1 CD146及CD34 的免疫组化检测 将骨肉瘤及骨肉瘤周围非恶性组织标本制成4μm切片,参照试剂盒说明书进行免疫组织化学染色。简要过程如下:切片用二甲苯脱蜡后浸泡,高压抗原修复,血清封闭加一抗,4℃孵育过夜,再复温后加入二抗,孵育。用DAB 显色,苏木精对比染色后脱水、透明、封片。在光镜下观察结果。

    1.3.2 免疫组化结果判定 CD146 以胞质及胞膜中出现棕黄色染色颗粒为阳性。微血管密度(microvessel density MVD)计数标准参照Weidner等校正并修改方法。采用 CD34 免疫组化染色标记血管内皮细胞,以胞质及胞膜中出现棕黄色染色颗粒为阳性。单个内皮细胞或细胞团,不管有没有形成管腔,只要被抗体染色并与周围的微血管、肿瘤细胞和其他连接组织分离,都认为是1个微血管,有平滑肌壁及管腔直径约大于8个红细胞直径的血管排除在外。先用低倍镜(×100)下在每一个标本中选择3个微血管数最多的区域,在每一个区域中计数1个高倍镜(×400)下的微血管数,取其均值为MVD值。

    1.3.3 肉瘤组织中CD146的表达及western blot分析 提取组织样本中总RNA ......
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