大鼠在体肠吸收方法研究
摘要：目的 介绍大鼠在体及离体肠吸收的实验方法及研究进展。方法 对有代表性的文章进行分析，归纳和整理。结果 综述了药物在体及离体肠吸收的操作及应用。结论 采用大鼠在体及离体模型对药物肠道吸收行为作出科学的评价。
关键词：大鼠；肠吸收；方法
1 大鼠在体模型
1.1单向灌流模型
1.1.1实验方法[1，2] 将禁食大鼠，ip0.2g/ml乌拉坦溶液麻醉(5ml/kg)，行固定设置，采取红外灯保证试验体温在37℃，随后按照腹部中心线切开腹腔3cm，将试验段肠行两端标准切开之后置入管道结扎。将生理盐水(37℃)按照一定流速灌肠清洁，随后完全排空生理盐水，连接装置，按照事先准备的使用药液(37℃)进行供罐，统计记录液体灌流时间，并收集不同时间段内外流积液，并精确量取流出液体积和供试液减少的体积数或重量。
, 百拇医药
1.1.2特点 通过直接测定灌入量和流出量的体积或重量变化，借以判断某种物质的吸收情况。
廖正根等人运用单向灌流模型并采用HPLC法分别测定桂枝茯苓胶囊内容物的灌流液以及直接溶解有这3种成分的灌流液在肠灌流过程中的浓度变化[2]。结论：桂枝茯苓胶囊中3种有效成分在大鼠小肠主要以被动扩散方式吸收。
1.2循环灌流模型
1.2.1实验方法[3，4] 将禁食大鼠ip戊巴比妥钠40mg/kg，麻醉后固定。沿腹中线切开腹腔(约2.5cm)，在实验肠管两端各切一小口，在上端小口处插入直径为0.3cm的玻璃管，并用线扎紧。用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗去肠管内容物至净。然后在实验肠管下端小口处插入玻璃管，并用线扎紧。将肠管两端的玻璃管与蠕动泵的胶管连接，形成回路，开动蠕动泵。先以一定流速循环10min后，将流速调为2.5ml/min，分别于回流后0.25、0.5、1.0、1.5、2.、2.5、3.0h取样5ml，经0.45μm微孔滤膜滤过，分别用测定药物的浓度。
, 百拇医药
1.2.2特点 循环一定时间后，分析肠管内，外液中物质浓度的变化，测定其运转情况。宋洪涛等人采用大鼠在体肠段灌流实验[4]，主要从药物浓度、pH值、吸收部位等3方面对红花黄色素的肠段吸收特性进行研究。结果：各肠段的吸收速率常数按空肠、十二指肠、回肠、结肠顺序依次下降。
1.3肠襻法
1.3.1实验方法[5] 将大鼠麻醉，开腹结扎肠腔，需做部位研究时，可分段结扎肠腔，将含有一定浓度的人工肠液诸如肠襻中，经过一定时间吸收后，取出肠襻，收集冲洗肠腔内肠液，测定药物剩余量。
1.3.2特点[5] 通过测定药物的剩余量，了解药物的吸收情况，且该发较在体回流法操作简单，但由于肠腔内容物存在，分析样品处理较复杂。
2 大鼠离体模型
2.1外翻肠囊法
, http://www.100md.com
2.1.1实验方法[6] 麻醉动物，取出小肠，一端插管注入生理盐水排除内容物。用一细玻棒将其翻转，使黏膜朝外浆膜朝内。肠一端节扎，另一端接一取样器，注入一定体积台氏液于肠囊内并将肠囊置于含有台氏液(内含药物)的瓶中，37℃孵育，充分供氧，定时取样。
2.1.2特点[7] 首先将动物麻醉，或实验前处死。这样的小肠外翻后，肠浆膜表面所附着的液体很少，从而能较精确的了解吸收后浆膜侧液体的容积和成分。它不仅是一个很好的观察吸收的方法，而且还能用于研究生物膜的转运机制。何盛江和栾立标[8]采用离体小肠翻转肠囊实验，考察了卵磷脂等对苦参碱小肠吸收的促进效果结果：在几种促进剂中，以0.2%SDS对苦参碱的吸收促进作用最为明显。李昊[9]等人对不同肠段(回肠和空肠)的肠管外翻模型进行考察。结果，Rg1在不同肠段的吸收良好，且无明显差异。
2.2外翻环法
2.2.1实验方法[9] 先行将完全分离的一段小肠于一端应用手术线细扎，随后应用玻璃杆经肠腔向结扎肠端口推动，并行翻转。将小肠行横切做环形状分割。将肠环置于药液且确保氧化环境充分的缓冲液内进行孵育。注意在孵育过程应置于水浴摇床之中，从而提升缓冲液温度的控制以及加强搅动力度。最后将肠环置于冰冷缓冲液清洁，停止肠环对药物的摄取。取小肠环、干燥处理、过秤计重，消化肠环，分析药物含量。
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2.2.2特点[6] 肠黏膜在孵育过程中可导致上皮细胞的损伤，更长时间的孵育可能导致上皮细胞的脱落。所以，外翻环的孵育时间最好控制在10min以内。在环制备的过程中保持在4℃，尽量减小孵育过程中组织的损伤程度。
2.3组织流动室法
2.3.1实验方法 将离体肠段剪开形成一定面积的小肠块，安装于扩散池中。扩散池中装入缓冲液。通入空气搅动缓冲液来控制未搅动水层厚度，并且提供组织氧气。药物加入供应室，在接收室取样测量药物不同时间的累积量。剥离肠道的肌肉层以去除其对上皮细胞转运功能的影响。通常向黏膜及浆膜缓冲液中加入谷酰胺或葡萄糖等作为能量源，使组织具有最大可能的存活能力。
2.3.2特点 ①可以改变供应室的化合物组成以研究离子、pH值及其它物质等对药物转运的影响。Uchiyama等用流动室模型研究了几种促进剂对胰岛素透膜吸收的影响[10]，并评价促进剂的肠道毒性作用。②通过从黏膜及浆膜侧缓冲液中取样，可以测定黏膜到浆膜或者反方向上的药物流量，以确定药物是被动扩散吸收还是以载体介导的转运吸收。③可研究肠道对药物的代谢作用。
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3 结论
笔者认为，在体及离体都有各自的特点，需要根据自身需要选择合适的方法。通过实验模型和实验结果对药物的肠道吸收情况作出科学的判断。
参考文献：
[1]聂淑芳，潘卫三，杨星钢，等.对大鼠在体肠单向灌流技术中重量法的评价[J].中国新药杂志，2005，14(10)：1176-1179.
[2]廖正根，平其能，萧伟，等.桂枝茯苓胶囊中有效成分的大鼠在体肠吸收研究[J].中国天然药物，2005，3(5)：303-306.
[3]李芸霞，蒋学华，周静.大鼠在体吸收连翘苷的机理研究[J].华西药学杂志，2005，20(5)：387-390.
[4]宋洪涛，张跃新，郭涛，等.红花黄色素在大鼠体肠吸收动力学研究[J].解放军药学学报，2005，21(4)：245-247.
, 百拇医药
[5]梁桂贤，刘谦民.药物肠吸收研究方法近况[J].国外医药-合成药生化药制剂分册，1998，19(4)：251-253.
[6]李高，方超.药物肠道吸收的生物学研究方法[J].中国药学杂志，2002，37(10)：726-729.
[7]沈凯，王景田.药物肠吸收实验研究方法进展[J].中国新药杂志，2003，12(12)：988-991.
[8]何盛江，栾立标.翻转肠囊法研究吸收促进剂对小肠吸收苦参碱的作用[J].药学进展实验与研究，2004，28(3)：126-128.
[9]李昊，孙建国，谢海棠，等.大鼠肠管外翻模型对人参皂苷Rg1吸收机制的研究[J].中国临床药理学与治疗学，2004，9(5)：510-514.
[10]Uchiyama T，Sugiyama T，Quan YS，et al.Enhanced permeability of insulinacross the ratintestinal membrane by various absorption enhancers：the irintestinalmucosal toxicity and absorption enhancing mechanism of nlauryl beta Dmaltopyranoside[J].J Pharm Pharmacol，1999，51：1241.
编辑/赵恒德, 百拇医药(李利萍)
关键词：大鼠；肠吸收；方法
1 大鼠在体模型
1.1单向灌流模型
1.1.1实验方法[1，2] 将禁食大鼠，ip0.2g/ml乌拉坦溶液麻醉(5ml/kg)，行固定设置，采取红外灯保证试验体温在37℃，随后按照腹部中心线切开腹腔3cm，将试验段肠行两端标准切开之后置入管道结扎。将生理盐水(37℃)按照一定流速灌肠清洁，随后完全排空生理盐水，连接装置，按照事先准备的使用药液(37℃)进行供罐，统计记录液体灌流时间，并收集不同时间段内外流积液，并精确量取流出液体积和供试液减少的体积数或重量。
, 百拇医药
1.1.2特点 通过直接测定灌入量和流出量的体积或重量变化，借以判断某种物质的吸收情况。
廖正根等人运用单向灌流模型并采用HPLC法分别测定桂枝茯苓胶囊内容物的灌流液以及直接溶解有这3种成分的灌流液在肠灌流过程中的浓度变化[2]。结论：桂枝茯苓胶囊中3种有效成分在大鼠小肠主要以被动扩散方式吸收。
1.2循环灌流模型
1.2.1实验方法[3，4] 将禁食大鼠ip戊巴比妥钠40mg/kg，麻醉后固定。沿腹中线切开腹腔(约2.5cm)，在实验肠管两端各切一小口，在上端小口处插入直径为0.3cm的玻璃管，并用线扎紧。用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗去肠管内容物至净。然后在实验肠管下端小口处插入玻璃管，并用线扎紧。将肠管两端的玻璃管与蠕动泵的胶管连接，形成回路，开动蠕动泵。先以一定流速循环10min后，将流速调为2.5ml/min，分别于回流后0.25、0.5、1.0、1.5、2.、2.5、3.0h取样5ml，经0.45μm微孔滤膜滤过，分别用测定药物的浓度。
, 百拇医药
1.2.2特点 循环一定时间后，分析肠管内，外液中物质浓度的变化，测定其运转情况。宋洪涛等人采用大鼠在体肠段灌流实验[4]，主要从药物浓度、pH值、吸收部位等3方面对红花黄色素的肠段吸收特性进行研究。结果：各肠段的吸收速率常数按空肠、十二指肠、回肠、结肠顺序依次下降。
1.3肠襻法
1.3.1实验方法[5] 将大鼠麻醉，开腹结扎肠腔，需做部位研究时，可分段结扎肠腔，将含有一定浓度的人工肠液诸如肠襻中，经过一定时间吸收后，取出肠襻，收集冲洗肠腔内肠液，测定药物剩余量。
1.3.2特点[5] 通过测定药物的剩余量，了解药物的吸收情况，且该发较在体回流法操作简单，但由于肠腔内容物存在，分析样品处理较复杂。
2 大鼠离体模型
2.1外翻肠囊法
, http://www.100md.com
2.1.1实验方法[6] 麻醉动物，取出小肠，一端插管注入生理盐水排除内容物。用一细玻棒将其翻转，使黏膜朝外浆膜朝内。肠一端节扎，另一端接一取样器，注入一定体积台氏液于肠囊内并将肠囊置于含有台氏液(内含药物)的瓶中，37℃孵育，充分供氧，定时取样。
2.1.2特点[7] 首先将动物麻醉，或实验前处死。这样的小肠外翻后，肠浆膜表面所附着的液体很少，从而能较精确的了解吸收后浆膜侧液体的容积和成分。它不仅是一个很好的观察吸收的方法，而且还能用于研究生物膜的转运机制。何盛江和栾立标[8]采用离体小肠翻转肠囊实验，考察了卵磷脂等对苦参碱小肠吸收的促进效果结果：在几种促进剂中，以0.2%SDS对苦参碱的吸收促进作用最为明显。李昊[9]等人对不同肠段(回肠和空肠)的肠管外翻模型进行考察。结果，Rg1在不同肠段的吸收良好，且无明显差异。
2.2外翻环法
2.2.1实验方法[9] 先行将完全分离的一段小肠于一端应用手术线细扎，随后应用玻璃杆经肠腔向结扎肠端口推动，并行翻转。将小肠行横切做环形状分割。将肠环置于药液且确保氧化环境充分的缓冲液内进行孵育。注意在孵育过程应置于水浴摇床之中，从而提升缓冲液温度的控制以及加强搅动力度。最后将肠环置于冰冷缓冲液清洁，停止肠环对药物的摄取。取小肠环、干燥处理、过秤计重，消化肠环，分析药物含量。
, http://www.100md.com
2.2.2特点[6] 肠黏膜在孵育过程中可导致上皮细胞的损伤，更长时间的孵育可能导致上皮细胞的脱落。所以，外翻环的孵育时间最好控制在10min以内。在环制备的过程中保持在4℃，尽量减小孵育过程中组织的损伤程度。
2.3组织流动室法
2.3.1实验方法 将离体肠段剪开形成一定面积的小肠块，安装于扩散池中。扩散池中装入缓冲液。通入空气搅动缓冲液来控制未搅动水层厚度，并且提供组织氧气。药物加入供应室，在接收室取样测量药物不同时间的累积量。剥离肠道的肌肉层以去除其对上皮细胞转运功能的影响。通常向黏膜及浆膜缓冲液中加入谷酰胺或葡萄糖等作为能量源，使组织具有最大可能的存活能力。
2.3.2特点 ①可以改变供应室的化合物组成以研究离子、pH值及其它物质等对药物转运的影响。Uchiyama等用流动室模型研究了几种促进剂对胰岛素透膜吸收的影响[10]，并评价促进剂的肠道毒性作用。②通过从黏膜及浆膜侧缓冲液中取样，可以测定黏膜到浆膜或者反方向上的药物流量，以确定药物是被动扩散吸收还是以载体介导的转运吸收。③可研究肠道对药物的代谢作用。
, http://www.100md.com
3 结论
笔者认为，在体及离体都有各自的特点，需要根据自身需要选择合适的方法。通过实验模型和实验结果对药物的肠道吸收情况作出科学的判断。
参考文献：
[1]聂淑芳，潘卫三，杨星钢，等.对大鼠在体肠单向灌流技术中重量法的评价[J].中国新药杂志，2005，14(10)：1176-1179.
[2]廖正根，平其能，萧伟，等.桂枝茯苓胶囊中有效成分的大鼠在体肠吸收研究[J].中国天然药物，2005，3(5)：303-306.
[3]李芸霞，蒋学华，周静.大鼠在体吸收连翘苷的机理研究[J].华西药学杂志，2005，20(5)：387-390.
[4]宋洪涛，张跃新，郭涛，等.红花黄色素在大鼠体肠吸收动力学研究[J].解放军药学学报，2005，21(4)：245-247.
, 百拇医药
[5]梁桂贤，刘谦民.药物肠吸收研究方法近况[J].国外医药-合成药生化药制剂分册，1998，19(4)：251-253.
[6]李高，方超.药物肠道吸收的生物学研究方法[J].中国药学杂志，2002，37(10)：726-729.
[7]沈凯，王景田.药物肠吸收实验研究方法进展[J].中国新药杂志，2003，12(12)：988-991.
[8]何盛江，栾立标.翻转肠囊法研究吸收促进剂对小肠吸收苦参碱的作用[J].药学进展实验与研究，2004，28(3)：126-128.
[9]李昊，孙建国，谢海棠，等.大鼠肠管外翻模型对人参皂苷Rg1吸收机制的研究[J].中国临床药理学与治疗学，2004，9(5)：510-514.
[10]Uchiyama T，Sugiyama T，Quan YS，et al.Enhanced permeability of insulinacross the ratintestinal membrane by various absorption enhancers：the irintestinalmucosal toxicity and absorption enhancing mechanism of nlauryl beta Dmaltopyranoside[J].J Pharm Pharmacol，1999，51：1241.
编辑/赵恒德, 百拇医药(李利萍)