食品中胭脂虫红的高效液相色谱测定法
摘要：目的 建立高效液相色谱法测定食品中胭脂虫红的方法。方法 采用提取的溶液为：盐酸和甲醇，检测仪器为：高效液相色谱和二极管阵列，提取和检测时保留時间定性，定量采用外标法。结果 在100 mg/L时线性关系良好，当线性相关系数>0.999，方法检出限为0.0004g/kg，方法定量限为0.001g/kg，加标回收率是92.3%～105.6%，0.7%～6.5%是相对标准偏差数值。结论 采用本文方法的特点是简单实用，该方法适合各类食品中胭脂虫红的检测。
关键词：食品；胭脂虫红；高效液；相色；谱测定法
胭脂虫红，英文名是：carmine cochineal，中南美洲、墨西哥等地的蒽醌类天然红色素是胭脂虫红的原产地，胭脂红酸，英文名：camlinicacid，胭脂红酸属于活性成分，胭脂红酸应用于食品、化妆产品品、药类产品、纺织产品，应用广泛，胭脂虫红是安全和天然的色素。之一而用于眼部化妆品中。提取胭脂虫红色素的原料是寄生在仙人掌类植物上的雌性胭脂虫。在各类食品中的使用量方面，我国已做出了具体规定，但是还没有建立胭脂虫红国家检验，还没有建立胭脂虫红行业检验标准，对于胭脂虫红的质量标准与检验方法也没有做出具体规定。所以，对于对食品中胭脂虫红的含量检测中，应当建立稳定可靠的方法，为其在食品中的含量检测提供科学的指导。根据我国的具体状况，我们所采用的检测方法的特点是实用简单，这种方法就是胭脂虫红的高效液相色谱测定法。
1资料与方法
1.1仪管与试剂 岛津高效液相色谱仪，规格为LC-20AD，二极管阵列检测器、恒温水浴锅、均质机、粉碎机、电子天平、离心机、0.22 μm尼龙膜作为辅助仪器；胭脂虫红标准物质，纯度≥98%，用胭脂红酸来计算，德国Dr.EhrenstorferGmb H为其采购地；甲醇，就是色谱纯，乙腈，指色谱纯；盐酸溶液2 mol/L：准确量取盐酸，容量为20盐酸，注入水中，水量为100 ml，将其混匀；甲酸溶液：准确吸取甲酸，容量为9 ml甲酸，将其倒置容量瓶中，体积为1000 ml，用水定容，之后将其混匀[1]。
1.2方法
1.2.1色谱条件 ①迪马 Diamonsil C18；②反相色谱柱，值为：250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：乙腈∶甲酸溶液；脱洗流速为0.8 ml/min；柱温为35℃；进样量为10 μl；495 nm为检测波长。
1.2.2样品前处理
1.2.2.1配制酒和饮料 准确称取约2 g试样于具塞比色管中，其容量为50 ml，加入盐酸溶液，容量为10 ml，以甲醇定容，混匀至数值为25 ml，封紧盖子应用封口膜，80 ℃水浴30 min。水浴后，把试样温度冷切与室温相同，并静置，时间为30 min，吸取上清液，过0.22 μm尼龙膜上机测定。
1.2.2.2冰激凌 把试样放置在室内，等其融化成液体，将试样搅匀，按方法制备，方法为1.2.2.1。将其水浴，后将其冷却和室温相同，其次以12000 r/min，5 min为离心值，放入冰箱，温度为 4 ℃；取出静置，待和室温相同后，吸取上清液过0.22 μm尼龙膜上机测定。
1.2.2.3糖果 将糖果试样粉碎，粉碎仪器为粉碎机，按方法制备，方法为1.2.2.1。水浴后，待冷切和室温相同后，以12000 r/min，5 min为离心值，吸取上清液过 0.22 μm尼龙膜上机测定。
1.2.2.4熟肉和膨化食品 将糖果试样粉碎，按方法制备，方法为1.2.2.1。将其水浴，后将其冷却和室温相同，其次以12 000 r/min，5 min为离心值，放入冰箱，温度为 4 ℃；取出静置，待和室温相同后，吸取上清液过0.22 μm尼龙膜上机测定[2]。
1.2.3标准溶液配制 准确称取标准物质，重量为10.0 mg，溶解采用甲醇溶，容切值至50 ml时，此溶液浓度为200 mg/L，在温度为4℃中它可储存2个月的时间。
1.2.4标准曲线的制备 依次准确吸取标准溶液，吸至具塞比色管中，具塞比色管体积为于50 ml，加入盐酸溶液同该试样处理，处理方法是1.2.2.1，盐酸溶液容量为10 ml，之后上机测定。纵坐标是胭脂虫红峰面积，横坐标是胭脂虫红浓度，单位为mg/L。
1.2.5结果 试样中胭脂虫红含量的计算公式为：试样中胭脂虫红含量为X-，(g/kg)为胭脂红酸计，为试样溶液中胭脂虫红浓度，一定容体积为V，单位为ml，取样量为m，单位为g。
1.2.6回收率和精密度试验 选取GB 2760-2014 中所列胭脂虫红限量值，添加4个浓度：低、中、高和与检出限靠近，在6 种试样中进行加标回收，应用精密度试验于6组试样中。对样品进行分组，每种样分为4个组次，7份样品在每组中称取。第一组量为0.001/kg，第二组是0.25/kg，第三组是0.50/kg，第四组是1.0 g/kg，加入胭脂虫红标准溶液到这4组样品中，0.001 g/kg数值为靠近检出限浓度，处理和测定方法与此前一样。
1.2.7方法检出限 使用标准曲线最低点峰高，计算方法检出限根据3倍噪声计算方法业计算，定量限根据 10 倍噪声计算方法计算，核对用空白样品加标[3]。
2结果
2.1线性范围和回归方程、检出限和定量限 范围是4.0～100 mg/L时胭脂虫红线性关系良好，线性相关系全部>0.999，方法检出限是0.0004g/kg，方法定量限的数值为0.001 g/kg。
2.2回收率和精密度 样品回收率范围数值是 92.3%～105.6%，相对标准偏差范围数值为0.7%～6.5%。
3讨论
3.1代表性样品的选择 允许使用胭脂虫红的具有代表性的试样，在进行测验过程中按照限量值来测验。
3.2方法适用范围 本文测定方法适合饮料、糖果、膨化食品等各类食品。
3.3前处理方法的确定 胭脂虫红在不同pH值下，胭脂虫红所呈现的颜色也不相同同，指在高效液相色谱仪检测器上的最大吸收峰不同，因此采用向样品提取液中，向其加入一定量的盐酸，把酸碱性质相异的试样整体调至呈酸性，使试样提取液稳定为最大吸收峰，峰值为495 nm，最终建立的测定方法具有稳定性和准确性。
3.4干扰 研究结果证明苯甲酸和对羟基苯甲酸乙酯以及对羟基苯甲酸丙酯在类似条件下不存在干扰，此外在类似条件不存在干扰还有对羟基苯甲酸丁酯、糖精钠、安赛蜜等 18 中常见食品添加剂；证明姜黄素、辣椒红素等天然色素与胭脂虫红混用不存在干扰。
参考文献：
[1]顾正健，黄雅佩，沈阳，等. 高效液相色谱法同时测定冷饮中禁限用色素胭脂虫红酸、喹啉黄和碱性蓝26[J].化学试剂，2014，04：325-328，342.
[2]付忠源.高效液相色谱法测定猪肉脯中胭脂虫红的含量[J]. 理化检验(化学分册)，2014，03：368-370.
[3]赵舰，甘源，肖义夫，等.反相高效液相色谱法测定食品中的苏丹红1号[A].重庆市预防医学会.重庆市预防医学会2006年学术交流会论文集[C].重庆市预防医学会，2006：5.
[4]虞成华， 陆志芸， 朱伟，等.反相高效液相色谱法测定食品中胭脂虫红色素[J].理化检验：化学分册，2012，48(8)：991-992.
[5]郭蒙京，李堃，赵丹莹.食品中胭脂虫红的高效液相色谱测定法[J].职业与健康，2016，32(18)：2508-2510.
编辑/高章利, 百拇医药(李晓莹)
关键词：食品；胭脂虫红；高效液；相色；谱测定法
胭脂虫红，英文名是：carmine cochineal，中南美洲、墨西哥等地的蒽醌类天然红色素是胭脂虫红的原产地，胭脂红酸，英文名：camlinicacid，胭脂红酸属于活性成分，胭脂红酸应用于食品、化妆产品品、药类产品、纺织产品，应用广泛，胭脂虫红是安全和天然的色素。之一而用于眼部化妆品中。提取胭脂虫红色素的原料是寄生在仙人掌类植物上的雌性胭脂虫。在各类食品中的使用量方面，我国已做出了具体规定，但是还没有建立胭脂虫红国家检验，还没有建立胭脂虫红行业检验标准，对于胭脂虫红的质量标准与检验方法也没有做出具体规定。所以，对于对食品中胭脂虫红的含量检测中，应当建立稳定可靠的方法，为其在食品中的含量检测提供科学的指导。根据我国的具体状况，我们所采用的检测方法的特点是实用简单，这种方法就是胭脂虫红的高效液相色谱测定法。
1资料与方法
1.1仪管与试剂 岛津高效液相色谱仪，规格为LC-20AD，二极管阵列检测器、恒温水浴锅、均质机、粉碎机、电子天平、离心机、0.22 μm尼龙膜作为辅助仪器；胭脂虫红标准物质，纯度≥98%，用胭脂红酸来计算，德国Dr.EhrenstorferGmb H为其采购地；甲醇，就是色谱纯，乙腈，指色谱纯；盐酸溶液2 mol/L：准确量取盐酸，容量为20盐酸，注入水中，水量为100 ml，将其混匀；甲酸溶液：准确吸取甲酸，容量为9 ml甲酸，将其倒置容量瓶中，体积为1000 ml，用水定容，之后将其混匀[1]。
1.2方法
1.2.1色谱条件 ①迪马 Diamonsil C18；②反相色谱柱，值为：250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：乙腈∶甲酸溶液；脱洗流速为0.8 ml/min；柱温为35℃；进样量为10 μl；495 nm为检测波长。
1.2.2样品前处理
1.2.2.1配制酒和饮料 准确称取约2 g试样于具塞比色管中，其容量为50 ml，加入盐酸溶液，容量为10 ml，以甲醇定容，混匀至数值为25 ml，封紧盖子应用封口膜，80 ℃水浴30 min。水浴后，把试样温度冷切与室温相同，并静置，时间为30 min，吸取上清液，过0.22 μm尼龙膜上机测定。
1.2.2.2冰激凌 把试样放置在室内，等其融化成液体，将试样搅匀，按方法制备，方法为1.2.2.1。将其水浴，后将其冷却和室温相同，其次以12000 r/min，5 min为离心值，放入冰箱，温度为 4 ℃；取出静置，待和室温相同后，吸取上清液过0.22 μm尼龙膜上机测定。
1.2.2.3糖果 将糖果试样粉碎，粉碎仪器为粉碎机，按方法制备，方法为1.2.2.1。水浴后，待冷切和室温相同后，以12000 r/min，5 min为离心值，吸取上清液过 0.22 μm尼龙膜上机测定。
1.2.2.4熟肉和膨化食品 将糖果试样粉碎，按方法制备，方法为1.2.2.1。将其水浴，后将其冷却和室温相同，其次以12 000 r/min，5 min为离心值，放入冰箱，温度为 4 ℃；取出静置，待和室温相同后，吸取上清液过0.22 μm尼龙膜上机测定[2]。
1.2.3标准溶液配制 准确称取标准物质，重量为10.0 mg，溶解采用甲醇溶，容切值至50 ml时，此溶液浓度为200 mg/L，在温度为4℃中它可储存2个月的时间。
1.2.4标准曲线的制备 依次准确吸取标准溶液，吸至具塞比色管中，具塞比色管体积为于50 ml，加入盐酸溶液同该试样处理，处理方法是1.2.2.1，盐酸溶液容量为10 ml，之后上机测定。纵坐标是胭脂虫红峰面积，横坐标是胭脂虫红浓度，单位为mg/L。
1.2.5结果 试样中胭脂虫红含量的计算公式为：试样中胭脂虫红含量为X-，(g/kg)为胭脂红酸计，为试样溶液中胭脂虫红浓度，一定容体积为V，单位为ml，取样量为m，单位为g。
1.2.6回收率和精密度试验 选取GB 2760-2014 中所列胭脂虫红限量值，添加4个浓度：低、中、高和与检出限靠近，在6 种试样中进行加标回收，应用精密度试验于6组试样中。对样品进行分组，每种样分为4个组次，7份样品在每组中称取。第一组量为0.001/kg，第二组是0.25/kg，第三组是0.50/kg，第四组是1.0 g/kg，加入胭脂虫红标准溶液到这4组样品中，0.001 g/kg数值为靠近检出限浓度，处理和测定方法与此前一样。
1.2.7方法检出限 使用标准曲线最低点峰高，计算方法检出限根据3倍噪声计算方法业计算，定量限根据 10 倍噪声计算方法计算，核对用空白样品加标[3]。
2结果
2.1线性范围和回归方程、检出限和定量限 范围是4.0～100 mg/L时胭脂虫红线性关系良好，线性相关系全部>0.999，方法检出限是0.0004g/kg，方法定量限的数值为0.001 g/kg。
2.2回收率和精密度 样品回收率范围数值是 92.3%～105.6%，相对标准偏差范围数值为0.7%～6.5%。
3讨论
3.1代表性样品的选择 允许使用胭脂虫红的具有代表性的试样，在进行测验过程中按照限量值来测验。
3.2方法适用范围 本文测定方法适合饮料、糖果、膨化食品等各类食品。
3.3前处理方法的确定 胭脂虫红在不同pH值下，胭脂虫红所呈现的颜色也不相同同，指在高效液相色谱仪检测器上的最大吸收峰不同，因此采用向样品提取液中，向其加入一定量的盐酸，把酸碱性质相异的试样整体调至呈酸性，使试样提取液稳定为最大吸收峰，峰值为495 nm，最终建立的测定方法具有稳定性和准确性。
3.4干扰 研究结果证明苯甲酸和对羟基苯甲酸乙酯以及对羟基苯甲酸丙酯在类似条件下不存在干扰，此外在类似条件不存在干扰还有对羟基苯甲酸丁酯、糖精钠、安赛蜜等 18 中常见食品添加剂；证明姜黄素、辣椒红素等天然色素与胭脂虫红混用不存在干扰。
参考文献：
[1]顾正健，黄雅佩，沈阳，等. 高效液相色谱法同时测定冷饮中禁限用色素胭脂虫红酸、喹啉黄和碱性蓝26[J].化学试剂，2014，04：325-328，342.
[2]付忠源.高效液相色谱法测定猪肉脯中胭脂虫红的含量[J]. 理化检验(化学分册)，2014，03：368-370.
[3]赵舰，甘源，肖义夫，等.反相高效液相色谱法测定食品中的苏丹红1号[A].重庆市预防医学会.重庆市预防医学会2006年学术交流会论文集[C].重庆市预防医学会，2006：5.
[4]虞成华， 陆志芸， 朱伟，等.反相高效液相色谱法测定食品中胭脂虫红色素[J].理化检验：化学分册，2012，48(8)：991-992.
[5]郭蒙京，李堃，赵丹莹.食品中胭脂虫红的高效液相色谱测定法[J].职业与健康，2016，32(18)：2508-2510.
编辑/高章利, 百拇医药(李晓莹)