培养工程化软骨的新方法(2)
1.5统计学方法
计量资料以(x±s)表示，应用SPSS 13.0统计软件分析，组间比较采用随机资料单因素方差分析，以P<0.05为差异学有统计意义。
2 结果
2.1组织工程软骨的大体观察
新西兰大白兔对手术操作耐受良好，1个月时取材，麻醉后由原切口入路，可见组织工程室表面覆盖包膜，打开包膜后见大量渗出液，肉芽组织基本充满组织工程室，除去组织工程室后可见原轴心血管保留完好，软组织块表面血管化良好。连带轴心血管将软组织块游离，仔细剥离软组织块表面组织，可见内部软骨样组织，并形成接近正方形块状结构，剖开后可见光滑质韧软骨样组织(见图1B)。工程化软骨体积及其在软骨质块中体积比统计见图2B。1个月时，软骨组织平均体积(1.869±0.187)ml，较原始体积增大约(543.4±71.3)%。在软骨样组织周围，可见较多纤维肉芽组织增生，包裹软骨组织。
, 百拇医药
2.2组织形态学观察
1个月时，HE显示原有软骨组织边界较为清晰，界限内软骨组织形态基本良好，部分软骨细胞略肥大，偶见少量钙化。而在软骨组织间隙中，存在新生软骨细胞区域(见图3)，其中软骨细胞形态良好，部分已出现成熟软骨细胞形态(图3黑色箭头示)未见明显软骨细胞肥大及钙化，且在细胞周围可见大量细胞外基质(图3白色箭头示)。并且，新生软骨细胞呈现出越靠近原有软骨，组织形态越加成熟的趋势，提示原有软骨在组织工程室环境下被诱导再生的可能性。
3 讨论
利用残耳软骨是目前耳再造中既避免继发缺损，又能获得弹性软骨的重要手段。但残耳软骨体积有限，要求较高的体外扩增倍数。而体外培养后的去分化现象却限制了通过传代获得大量软骨细胞及组织的方法。虽然从健侧切取耳软骨能一定程度上弥补基础软骨量的不足。但实现更大倍数的体积扩增才是解决问题的根本手段。本实验中已经诱导原有软骨体积在1个月内增大了5倍以上，并且这种再生很可能来源于原有软骨。虽然增大的体积还未达到可供临床使用的体积，在先前的报道中，组织工程室技术已经成功诱导出比原始体积增大15倍的脂肪组织[11]。考虑一方面和实验动物本身体积相关，另一方面考虑培养时间较短，在一项肋软骨的临床长期观察中发现，软骨的重塑過程可持续长达10个月[12-13]。同时，取材时工程化软骨组织基本位于工程室底部，考虑如能使软骨碎块在工程室内更加均匀地分布，有望更加均匀地诱导软骨组织地再生。同有报道通过加入自体富血小板血浆(PRP)作为自体支架培养软骨，并已取得良好的效果，但此法同样需要通过酶消化法获得单个软骨细胞，并进行体外培养及传代，无法保证外源性添加试剂的安全性。而组织工程室中早期亦可添加PRP使植入软骨分布在空间上更加均匀，下一步的实验将在这一方向上继续改进，进一步扩大组织工程软骨扩增倍数。并继续探索组织工程室诱导软骨体积增大的相关机制。
, 百拇医药
参考文献：
[1]Bly RA，Bhrany AD，Murakami CS，et al.Microtia Reconstruction[J].Facial Plastic Surgery Clinics of North America，2016，24(4)：577-591.
[2]Wilkes GH，Wong J，Guilfoyle R.Microtia Reconstruction[J].Plastic and Reconstructive Surgery，2014，134(3)：464-479.
[3]Ruder RO，Graham JJ.Evaluation and treatment of the deformed and malformed auricle[J].Clin Pediatr(Phila)，1996，35(9)：461-465.
, http://www.100md.com
[4]Chen ZC，Goh RC，Chen PK，et al.A new method for the second-stage auricular projection of the Nagata method：ultra-delicate split-thickness skin graft in continuity with full-thickness skin[J].Plast Reconstr Surg，2009，124(5)：1477-1485.
[5]Firmin F.State-of-the-art autogenous ear reconstruction in cases of microtia[J].Adv Otorhinolaryngol，2010(68)：25-52.
[6]Park C.Subfascial expansion and expanded two-flap method for microtia reconstruction[J].Plast Reconstr Surg，2000，106(7)：1473-1487.
, http://www.100md.com
[7]Qian J，Li Z，Liu T，et al.Auricular Reconstruction in Hemifacial Microsomia with an Expanded Two-Flap Method[J].Plastic and Reconstructive Surgery，2017，139(5)：1200-1209.
[8]Hofer S O，Knight K M，Cooper-White J J，et al.Increasing the volume of vascularized tissue formation in engineered constructs：an experimental study in rats[J].Plast Reconstr Surg，2003，111(3)：1186-1192，1193-1194., 百拇医药(雷忱 陈国杰 王彪)
计量资料以(x±s)表示，应用SPSS 13.0统计软件分析，组间比较采用随机资料单因素方差分析，以P<0.05为差异学有统计意义。
2 结果
2.1组织工程软骨的大体观察
新西兰大白兔对手术操作耐受良好，1个月时取材，麻醉后由原切口入路，可见组织工程室表面覆盖包膜，打开包膜后见大量渗出液，肉芽组织基本充满组织工程室，除去组织工程室后可见原轴心血管保留完好，软组织块表面血管化良好。连带轴心血管将软组织块游离，仔细剥离软组织块表面组织，可见内部软骨样组织，并形成接近正方形块状结构，剖开后可见光滑质韧软骨样组织(见图1B)。工程化软骨体积及其在软骨质块中体积比统计见图2B。1个月时，软骨组织平均体积(1.869±0.187)ml，较原始体积增大约(543.4±71.3)%。在软骨样组织周围，可见较多纤维肉芽组织增生，包裹软骨组织。
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2.2组织形态学观察
1个月时，HE显示原有软骨组织边界较为清晰，界限内软骨组织形态基本良好，部分软骨细胞略肥大，偶见少量钙化。而在软骨组织间隙中，存在新生软骨细胞区域(见图3)，其中软骨细胞形态良好，部分已出现成熟软骨细胞形态(图3黑色箭头示)未见明显软骨细胞肥大及钙化，且在细胞周围可见大量细胞外基质(图3白色箭头示)。并且，新生软骨细胞呈现出越靠近原有软骨，组织形态越加成熟的趋势，提示原有软骨在组织工程室环境下被诱导再生的可能性。
3 讨论
利用残耳软骨是目前耳再造中既避免继发缺损，又能获得弹性软骨的重要手段。但残耳软骨体积有限，要求较高的体外扩增倍数。而体外培养后的去分化现象却限制了通过传代获得大量软骨细胞及组织的方法。虽然从健侧切取耳软骨能一定程度上弥补基础软骨量的不足。但实现更大倍数的体积扩增才是解决问题的根本手段。本实验中已经诱导原有软骨体积在1个月内增大了5倍以上，并且这种再生很可能来源于原有软骨。虽然增大的体积还未达到可供临床使用的体积，在先前的报道中，组织工程室技术已经成功诱导出比原始体积增大15倍的脂肪组织[11]。考虑一方面和实验动物本身体积相关，另一方面考虑培养时间较短，在一项肋软骨的临床长期观察中发现，软骨的重塑過程可持续长达10个月[12-13]。同时，取材时工程化软骨组织基本位于工程室底部，考虑如能使软骨碎块在工程室内更加均匀地分布，有望更加均匀地诱导软骨组织地再生。同有报道通过加入自体富血小板血浆(PRP)作为自体支架培养软骨，并已取得良好的效果，但此法同样需要通过酶消化法获得单个软骨细胞，并进行体外培养及传代，无法保证外源性添加试剂的安全性。而组织工程室中早期亦可添加PRP使植入软骨分布在空间上更加均匀，下一步的实验将在这一方向上继续改进，进一步扩大组织工程软骨扩增倍数。并继续探索组织工程室诱导软骨体积增大的相关机制。
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参考文献：
[1]Bly RA，Bhrany AD，Murakami CS，et al.Microtia Reconstruction[J].Facial Plastic Surgery Clinics of North America，2016，24(4)：577-591.
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[5]Firmin F.State-of-the-art autogenous ear reconstruction in cases of microtia[J].Adv Otorhinolaryngol，2010(68)：25-52.
[6]Park C.Subfascial expansion and expanded two-flap method for microtia reconstruction[J].Plast Reconstr Surg，2000，106(7)：1473-1487.
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[7]Qian J，Li Z，Liu T，et al.Auricular Reconstruction in Hemifacial Microsomia with an Expanded Two-Flap Method[J].Plastic and Reconstructive Surgery，2017，139(5)：1200-1209.
[8]Hofer S O，Knight K M，Cooper-White J J，et al.Increasing the volume of vascularized tissue formation in engineered constructs：an experimental study in rats[J].Plast Reconstr Surg，2003，111(3)：1186-1192，1193-1194., 百拇医药(雷忱 陈国杰 王彪)