不同雷公藤制剂中6个成分的含量研究(3)
2.3.5加样回收试验 取6份批号为160401的雷公藤多苷片约0.075 g，精密称定;分别精密加入与供试品中各成分相同含量的6个对照品，按2.2项下供试品溶液制备方法平行制备6份供试品溶液，按拟定色谱条件进行分析，计算回收率。结果见表2。
2.4样品含量测定 取市售临床常用的雷公藤产品，按拟订色谱条件测定样品中的6个成分的含量。结果见表3。
3讨论
本试验在流动相优化中选用乙腈为有机相(A)分离效果较好，保留时间适中，色谱信息丰富。同时发现在碱性条件下，可以更好的分离不同色谱峰，故为保护色谱柱选用低浓度的乙酸铵(10 mmol/ml)作为流动相(B)(0～15 min，10%B→35%B;15～22 min，35%B→35%B;22～30 min，35%B→55%B;30～35 min，55%B;35～40 min，55%B→60%B;40～70min，60%B→85%B;70～75 min，85%B→95%B;75～80 min，95%B→10%B)进行梯度洗脱。选用梯度洗脱的色谱条件，可更好的分离不同的色谱峰，使实验数据更为准确。实验中曾采用：①WondaSil-C18(4.6 mm×250mm，5 μm);②Sapphire-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);③Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱进行比较，但实验图谱显示①和②的分离效果不好，后来选用Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，发现基线和柱压平稳，且测出来的色谱峰值、分离度等指标值均较为理想。雷公藤多苷的化学组成较为复杂，虽经上柱除杂等前处理，色谱分析所得图谱上仍显示样品液中众多化合物的存在，分离起来有一定的困难，故现有文献基本对其进行1个或2个组分的测定。同时，通过对样品前处理进行优化，以达到处理后样品较未处理样品，目标物没有减少，而且目标峰更为清晰。
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雷公藤制剂在肾脏病治疗方面，疗效确切，作用途径多样化，在中医药防治肾脏病方面，临床优势明显，但其毒副作用也不容忽视，主要表现在消化、泌尿、生殖、造血系统及皮肤等多系统方面，可能引起多器官的损害，有效成份与毒性成分较难区别[9，10]。本次研究结果表明：不同厂家生产的雷公藤多苷提取物化学组成存在明显的差异。如：雷公藤红素和雷公藤甲素最高和最低含量之间相差10倍，其它组分的含量差异也较大。不同厂家的雷公藤制剂成分含量有一定差异，同一厂家不同批号的雷公藤制剂之间成分含量也有一定差异。分析其原因，除与雷公藤药材本身的来源有关外，也与制作工艺、条件、剂型的不同有必然的关系。但如何质控仍在探索阶段[11]。
雷公藤甲素是该类药物的主要有效成分，但毒性也很大，近年来有关其结构修饰等减毒研究为其热点，如雷公藤甲素脂质体、雷公藤红素固体脂质纳米粒、雷公藤红素缓释滴丸[12-14]等单体成分缓释制剂等。以雷公藤甲素为例，正在进行Ⅰ期临床试验的新药(5R)-5-羟基雷公藤甲素就是以雷公藤甲素为母体并修饰而成，其具有显著的体内抗炎作用和免疫抑制活性，未见受试者体内有药物累积现象，减毒增效作用显著[15]。本试验对临床上常用的雷公藤多苷片、昆明山海棠片、昆仙胶囊，采用HPLC方法测定其主要成分：雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤次碱、雷公藤红素、雷公藤内酯甲的含量，为下一步研究其不同单体组合对体外培养的卵巢细胞的生殖毒性作用，并在配伍中药辨证治疗后分析其毒副作用的情况，从体内和体外实验阐述其增效减毒的效应和作用机理奠定基础。
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参考文献：
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[10]姚金成，刘颖，胡领，等.雷公藤甲素对人肝细胞L-02氧化损伤的初步研究[J].中南药学，2012，10(8)：581-584.
[11]杨迎光，张渝渝，翁代群，等.UPLC-MS测定不同产地及不同部位昆明山海棠中6种活性成分含量[J].天然产物研究与开发，2016，28(3)：382-387.
[12]王淑娟.雷公藤甲素脂质体的制备及质量的初步研究[D].扬州大学，2010.
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[14]夏海建，张振海，贾晓斌.雷公藤红素缓释滴丸的研究[J].中草药，2013，44(7)：834-838.
[15]赵舜波，黄海华，陈笑艳，等.微生物转化法从雷公藤甲素合成雷腾舒[J].中国新药杂志，2012(3)：303-309., http://www.100md.com(祁爱蓉 傅博 刘小燕 李顺民 文善适 郑平 陈剑平)
2.4样品含量测定 取市售临床常用的雷公藤产品，按拟订色谱条件测定样品中的6个成分的含量。结果见表3。
3讨论
本试验在流动相优化中选用乙腈为有机相(A)分离效果较好，保留时间适中，色谱信息丰富。同时发现在碱性条件下，可以更好的分离不同色谱峰，故为保护色谱柱选用低浓度的乙酸铵(10 mmol/ml)作为流动相(B)(0～15 min，10%B→35%B;15～22 min，35%B→35%B;22～30 min，35%B→55%B;30～35 min，55%B;35～40 min，55%B→60%B;40～70min，60%B→85%B;70～75 min，85%B→95%B;75～80 min，95%B→10%B)进行梯度洗脱。选用梯度洗脱的色谱条件，可更好的分离不同的色谱峰，使实验数据更为准确。实验中曾采用：①WondaSil-C18(4.6 mm×250mm，5 μm);②Sapphire-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);③Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱进行比较，但实验图谱显示①和②的分离效果不好，后来选用Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，发现基线和柱压平稳，且测出来的色谱峰值、分离度等指标值均较为理想。雷公藤多苷的化学组成较为复杂，虽经上柱除杂等前处理，色谱分析所得图谱上仍显示样品液中众多化合物的存在，分离起来有一定的困难，故现有文献基本对其进行1个或2个组分的测定。同时，通过对样品前处理进行优化，以达到处理后样品较未处理样品，目标物没有减少，而且目标峰更为清晰。
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雷公藤制剂在肾脏病治疗方面，疗效确切，作用途径多样化，在中医药防治肾脏病方面，临床优势明显，但其毒副作用也不容忽视，主要表现在消化、泌尿、生殖、造血系统及皮肤等多系统方面，可能引起多器官的损害，有效成份与毒性成分较难区别[9，10]。本次研究结果表明：不同厂家生产的雷公藤多苷提取物化学组成存在明显的差异。如：雷公藤红素和雷公藤甲素最高和最低含量之间相差10倍，其它组分的含量差异也较大。不同厂家的雷公藤制剂成分含量有一定差异，同一厂家不同批号的雷公藤制剂之间成分含量也有一定差异。分析其原因，除与雷公藤药材本身的来源有关外，也与制作工艺、条件、剂型的不同有必然的关系。但如何质控仍在探索阶段[11]。
雷公藤甲素是该类药物的主要有效成分，但毒性也很大，近年来有关其结构修饰等减毒研究为其热点，如雷公藤甲素脂质体、雷公藤红素固体脂质纳米粒、雷公藤红素缓释滴丸[12-14]等单体成分缓释制剂等。以雷公藤甲素为例，正在进行Ⅰ期临床试验的新药(5R)-5-羟基雷公藤甲素就是以雷公藤甲素为母体并修饰而成，其具有显著的体内抗炎作用和免疫抑制活性，未见受试者体内有药物累积现象，减毒增效作用显著[15]。本试验对临床上常用的雷公藤多苷片、昆明山海棠片、昆仙胶囊，采用HPLC方法测定其主要成分：雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤次碱、雷公藤红素、雷公藤内酯甲的含量，为下一步研究其不同单体组合对体外培养的卵巢细胞的生殖毒性作用，并在配伍中药辨证治疗后分析其毒副作用的情况，从体内和体外实验阐述其增效减毒的效应和作用机理奠定基础。
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[11]杨迎光，张渝渝，翁代群，等.UPLC-MS测定不同产地及不同部位昆明山海棠中6种活性成分含量[J].天然产物研究与开发，2016，28(3)：382-387.
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[15]赵舜波，黄海华，陈笑艳，等.微生物转化法从雷公藤甲素合成雷腾舒[J].中国新药杂志，2012(3)：303-309., http://www.100md.com(祁爱蓉 傅博 刘小燕 李顺民 文善适 郑平 陈剑平)