泰山山慈菇对小鼠肝癌的治疗作用及相关免疫机制研究(2)
1材料与方法1.1动物与试剂
1.1.1动物 健康雄性C57BL/6小鼠,鼠龄8周龄,体重18~22 g,购自北京维通利华验动物技术有限公司。饲养于泰山医学院实验动物中心,所有动物实验均得到泰山医学院动物伦理委员会许可。
1.1.2细胞及试剂 H22肝癌细胞株购自上海素尔生物科技有限公司。5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)购自上海迈瑞尔化学技术有限公司。小鼠TNF-α、IL-2和IFN-γ ELISA试剂盒均购自eBioscience公司。胎牛血清(杭州四季青生物工程材料公司),DMEM液体培养基(Gibco公司),AnnexinV/7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒(Biolegend公司),其他试剂均为国产分析纯。泰山山慈菇购自山东省泰安市金泰联药店。
1.2方法
1.2.1泰山山慈菇乙醇提取液 制備参照文献报道方法[2],并加以改进。制备方法:将150 g泰山山慈菇粉碎,加入500 ml双蒸水煮沸后过滤,药渣再煮2次,合并3次滤液。将3次滤液煎熬浓缩成500 ml ......
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