1.2.3非流行期 为每年5月～9月。每个活禽市场采集1份环境综合涂抹样，采集售卖禽类流动摊贩1～2家(每家1个环境综合涂抹样)，采集自养禽家庭1～2家(每家1个环境综合涂抹样)。

    1.3监测采集样品 按照流感疫情防控方案的要求，进行标本的采集、保存和运输，采样使用病毒采样管，主要采集家禽粪便标本，笼具表面涂抹物，禽类饮水，清洗禽类的污水，宰杀或摆放，禽肉案板表面的涂抹物及其他标本，标本在4 ℃条件下，24 h内送到实验室，未能按时送达，至于-70 ℃以下保存。

    1.4实验方法

    1.4.1仪器与试剂 荧光PCR检测仪器型号为美国ABI Stepone plus Real-time PCR，核酸提取试剂来源于西安天隆科技有限公司，PCR检测试剂来源于江苏硕世生物科技有限公司，检测技术依据为《职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监测方案(2011年版)》。

    1.4.2方法 采用病毒核酸提取试剂盒从环境标本中提取病毒RNA后，通过实时荧光定量聚合酶链反应，即荧光定量PCR，首先进行甲型流感病毒(FluA)通用引物核酸检测，若甲型阳性，则进行H5、H7、H9和N9亚型鉴定。

    荧光定量PCR反应液体系：总体积20 μl，包括RT-PCR反应液7.5 μl、酶混合液5 μl、反应液4 μl、模板3.5 μl、去RNA酶水3.5 μl；参数设置：50 ℃，30 min ......