过氧化物酶体增生物激活受体激活物对ox—LDL诱导内皮细胞c—fos表达的影响(2)
1.2氧化低密度脂蛋白的制备 分离低密度脂蛋白采用一次性密度梯度超速离心法。血浆来自十堰市中心血站血库。血浆于4 ℃、50000 r/min离心5 h。分离出的LDL在4 ℃的LDL透析36 h,无菌保存。用Lowry's法测定LDL的蛋白含量。把已氧化的LDL在无EDTA的PBS(0.01 mol/L,pH=7.4)中4 ℃透析36 h,然后加入含CuSO4 PBS液,使Cu2+的终浓度为5.00 μmol/L,37 ℃氧化18 h。氧化结束后置于含200.00 μmol/L EDTA 的PBS液中透析24 h,并于4 ℃避光保存。用琼脂糖凝胶电泳法鉴定LDL和ox-LDL的纯度,硫代巴比妥酸反应法测定LDL和ox-LDL的丙二醛含量以确定其氧化修饰程度。1.3人及静脉内皮细胞的培养及分组 无菌条件下挤出脐带血管中的血液,放入灭菌的含双抗的PBS瓶中,行细胞培养。取第4、5代亚汇合状态的HUVEC分组进行后续实验。含0.1% FBS M199组为空白对照组。①对照组:普通培养基;②ox-LDL组:培养基中加入终浓度50 μg/ml ox-LDL培养24 h;③K877组:0.2 μmol/L K877预先作用内皮细胞2 h,再加入终浓度为50 μg/ml ox-LDL培养24 h ......
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