IL-23在慢性乙型肝炎免疫调节中的作用研究(2)
1资料与方法
1.1一般资料 选择山西省人民医院住院及门诊HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者32例，其中男性18例，女性14例，年龄21～64岁，平均年龄(34.09±10.35)岁。所有患者均符合2010年中华医学会肝病学分会和感染病学分会联合制定的《慢性乙型肝炎防止指南》中的诊断标准，排除合并其他病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、药物性肝病、酒精性肝病、肝炎肝硬化等疾病。所有患者在半年内均未使用抗HBV药物治疗或免疫调节剂治疗。另外选择20例来自我院健康体检中心的健康体检者作为健康对照组，男性10例，女性10例，年龄25～62岁，平均年龄(35.10±9.34)岁。健康对照组与CHB患者性别、年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，研究可进行。
1.2方法 采用酶联免疫分析法(ELISA)检测血清IL-23水平，严格按照试剂说明书操作;采用Beckman Coulter流式细胞仪检测Th17细胞(CD3+CD8-IL-17A+T)百分率;全自动生化分析仪检测血清ALT。PerCPM-Cy5.5标记的抗人CD3单克隆抗体、FITC标记的抗人CD8单克隆抗体、PE标记的抗人IL-17A单克隆抗体，所有抗体均购自eBioscience公司。
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1.3观察指标 分析HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者与健康对照组血清IL-23水平及Th17细胞百分率;根据ALT水平将慢性乙型肝炎患者分为ALT<120 IU/ml组与ALT≥120 IU/ml组，进一步分析两组患者血清IL-23水平及Th17细胞百分率，并对两者相关性进行分析。
1.4统计学分析 应用SPSS17.0统计软件进行统计学分析，本研究资料符合正态分布，计量资料以(x±s)表示，组间比较采用t检验，相关性分析采用Pearson相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者Th17、IL-23的表达 与健康对照组相比，HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清IL-23表达、外周血中Th17细胞百分率均升高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1;HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者中ALT≥120 IU/ml血清IL-23浓度、外周血中Th17细胞百分率均高于ALT<120 IU/ml，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。
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2.2 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞百分率与IL-23表达水平相关性分析 慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞百分率、血清IL-23浓度与ALT程度呈正相关(r=0.56，P=0.001;r=0.59，P=0.001);Th17细胞百分率与血清IL-23浓度呈正相关(r=0.774，P=0.001)。
3讨论
我国是乙型病毒性患者较多，HBV慢性持续感染已成为严重公共卫生问题。HBV慢性感染与肝硬化、肝细胞癌的发生密切相关，但其发病的免疫机制目前尚不完全明确。研究表明，HBV介导的免疫应答是导致肝细胞损伤及炎症产生的主要原因[2]，而机体细胞免疫功能异常使得HBV逃避免疫监视和攻击，从而使得机体不能有效清除体内HBV。
Th17细胞是由初始CD4+T细胞分化的区别于Th1、Th2细胞的新型细胞亚群，以产生大量IL-17为特征。Th17细胞功能的发挥主要靠其分泌的细胞因子通过直接或间接的方式参与炎症反应。既往大量研究发现，Th17细胞在HBV慢性感染诱导的免疫应答中发挥着重要作用，其可导致肝细胞损伤而促进肝脏炎症[3，4]。活化的Th17细胞可分泌IL-17等一系列细胞因子，这些细胞因子可聚集在炎症部位，加重肝脏炎症反应程度及纤维化，进而加重患者病情[5]。
, http://www.100md.com
IL-23是IL-12细胞因子家族的成员之一，其主要由树突状细胞、巨噬细胞、B淋巴细胞等表达分泌[6]，参与机体抗肿瘤、抗感染免疫。IL-23作为一种促炎性细胞因子，是影响Th17细胞发挥免疫功能的关键细胞因子。IL-23可诱导Th17细胞亚群的分化，促进Th17细胞的持续增殖并维持细胞亚群稳定[7]。当抗原递呈细胞受病原体刺激后，诱导初始CD4+T细胞分泌IL-23等细胞因子并诱导Th17细胞分化成熟，活化的Th17细胞进一步表达IL-23受体从而发挥其免疫作用。
已有研究发现，IL-23通过维持和扩增Th17细胞，促进炎症因子的产生，从而增加患者的肝损伤程度。IL-23在正常肝脏细胞中表达水平很低，但在CHB患者中HBV可直接刺激肝细胞表达IL-23，受损肝细胞持续产生的IL-23可通过改变巨噬细胞功能而促进肝细胞癌的发生。本研究对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞百分率和IL-23表达水平及其相关性进行了分析。结果发现，慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞的数量及血清IL-23的表达高于健康对照组，且ALT≥120 IU/ml患者高于ALT<120 IU/ml的患者。进一步行相关性分析发现，慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞百分率、血清IL-23浓度与ALT程度呈正相关。
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综上所述，IL-23可能通过影响Th17细胞的免疫调节参与慢性乙型肝炎患者炎症的发生发展，但其具体作用机制仍需进一步深入研究。
参考文献：
[1]Weaver CT，Harrington LE，Mangan PR，et al.Th17：an effector CD4 T cell lineage with regulatory T cell ties[J].Immunity，2006，24(6)：677-688.
[2]Isogawa M，Tanaka Y.Immunobiology of hepatitis B virus infection[J].Hepatol Ras，2015，45(2)：179-189.
[3]Liu Y，Li L，Liu J，et al.Activated hepatic stellate cells directly induce pathogenic Th17 cells in chronic hepatitis B virus infection[J].Exp Cell Res，2017，359(1)：129-137.
, 百拇医药
[4]Yang C，Cui F，Chen LM，et al.Correlation between Th17 and nTreg cell frequencies and the stages of progression in chronic hepatitis B[J].Mol Med Rep，2016，13(1)：853-859.
[5]Paquissi FC.Immunity and fibrogenesis： the role of Th17/IL-17 axis in HBV and HCV-induced chronic hepatitis and progression to cirrhosis[J].Front Immuno，2017(8)：1195.
[6]Sun L，He C，Nair L，et al.Interleukin 12(IL-12)family cytokines： role in immune pathogenesis and treatment of CNS autoimmune disease[J].Cytokine，2015，75(2)：249-255.
[7]Gaffen SL，Jain R，Garg AV，et al.The IL-23-IL-17 immune axis： from mechanisms to therapeutic testing[J].Nat Rev Immunol，2014，14(9)：585-600.
收稿日期：2019-1-17;修回日期：2019-1-25
編辑/王朵梅作者简介：裴金仙(1984.8-)，女，山西平遥人，硕士，主治医师，主要从事病毒性肝炎发病的免疫机制研究, http://www.100md.com(裴金仙 陈天狮 任巧晶 王晋江 罗瑞丽)
1.1一般资料 选择山西省人民医院住院及门诊HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者32例，其中男性18例，女性14例，年龄21～64岁，平均年龄(34.09±10.35)岁。所有患者均符合2010年中华医学会肝病学分会和感染病学分会联合制定的《慢性乙型肝炎防止指南》中的诊断标准，排除合并其他病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、药物性肝病、酒精性肝病、肝炎肝硬化等疾病。所有患者在半年内均未使用抗HBV药物治疗或免疫调节剂治疗。另外选择20例来自我院健康体检中心的健康体检者作为健康对照组，男性10例，女性10例，年龄25～62岁，平均年龄(35.10±9.34)岁。健康对照组与CHB患者性别、年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，研究可进行。
1.2方法 采用酶联免疫分析法(ELISA)检测血清IL-23水平，严格按照试剂说明书操作;采用Beckman Coulter流式细胞仪检测Th17细胞(CD3+CD8-IL-17A+T)百分率;全自动生化分析仪检测血清ALT。PerCPM-Cy5.5标记的抗人CD3单克隆抗体、FITC标记的抗人CD8单克隆抗体、PE标记的抗人IL-17A单克隆抗体，所有抗体均购自eBioscience公司。
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1.3观察指标 分析HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者与健康对照组血清IL-23水平及Th17细胞百分率;根据ALT水平将慢性乙型肝炎患者分为ALT<120 IU/ml组与ALT≥120 IU/ml组，进一步分析两组患者血清IL-23水平及Th17细胞百分率，并对两者相关性进行分析。
1.4统计学分析 应用SPSS17.0统计软件进行统计学分析，本研究资料符合正态分布，计量资料以(x±s)表示，组间比较采用t检验，相关性分析采用Pearson相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者Th17、IL-23的表达 与健康对照组相比，HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清IL-23表达、外周血中Th17细胞百分率均升高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1;HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者中ALT≥120 IU/ml血清IL-23浓度、外周血中Th17细胞百分率均高于ALT<120 IU/ml，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。
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2.2 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞百分率与IL-23表达水平相关性分析 慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞百分率、血清IL-23浓度与ALT程度呈正相关(r=0.56，P=0.001;r=0.59，P=0.001);Th17细胞百分率与血清IL-23浓度呈正相关(r=0.774，P=0.001)。
3讨论
我国是乙型病毒性患者较多，HBV慢性持续感染已成为严重公共卫生问题。HBV慢性感染与肝硬化、肝细胞癌的发生密切相关，但其发病的免疫机制目前尚不完全明确。研究表明，HBV介导的免疫应答是导致肝细胞损伤及炎症产生的主要原因[2]，而机体细胞免疫功能异常使得HBV逃避免疫监视和攻击，从而使得机体不能有效清除体内HBV。
Th17细胞是由初始CD4+T细胞分化的区别于Th1、Th2细胞的新型细胞亚群，以产生大量IL-17为特征。Th17细胞功能的发挥主要靠其分泌的细胞因子通过直接或间接的方式参与炎症反应。既往大量研究发现，Th17细胞在HBV慢性感染诱导的免疫应答中发挥着重要作用，其可导致肝细胞损伤而促进肝脏炎症[3，4]。活化的Th17细胞可分泌IL-17等一系列细胞因子，这些细胞因子可聚集在炎症部位，加重肝脏炎症反应程度及纤维化，进而加重患者病情[5]。
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IL-23是IL-12细胞因子家族的成员之一，其主要由树突状细胞、巨噬细胞、B淋巴细胞等表达分泌[6]，参与机体抗肿瘤、抗感染免疫。IL-23作为一种促炎性细胞因子，是影响Th17细胞发挥免疫功能的关键细胞因子。IL-23可诱导Th17细胞亚群的分化，促进Th17细胞的持续增殖并维持细胞亚群稳定[7]。当抗原递呈细胞受病原体刺激后，诱导初始CD4+T细胞分泌IL-23等细胞因子并诱导Th17细胞分化成熟，活化的Th17细胞进一步表达IL-23受体从而发挥其免疫作用。
已有研究发现，IL-23通过维持和扩增Th17细胞，促进炎症因子的产生，从而增加患者的肝损伤程度。IL-23在正常肝脏细胞中表达水平很低，但在CHB患者中HBV可直接刺激肝细胞表达IL-23，受损肝细胞持续产生的IL-23可通过改变巨噬细胞功能而促进肝细胞癌的发生。本研究对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞百分率和IL-23表达水平及其相关性进行了分析。结果发现，慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞的数量及血清IL-23的表达高于健康对照组，且ALT≥120 IU/ml患者高于ALT<120 IU/ml的患者。进一步行相关性分析发现，慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞百分率、血清IL-23浓度与ALT程度呈正相关。
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综上所述，IL-23可能通过影响Th17细胞的免疫调节参与慢性乙型肝炎患者炎症的发生发展，但其具体作用机制仍需进一步深入研究。
参考文献：
[1]Weaver CT，Harrington LE，Mangan PR，et al.Th17：an effector CD4 T cell lineage with regulatory T cell ties[J].Immunity，2006，24(6)：677-688.
[2]Isogawa M，Tanaka Y.Immunobiology of hepatitis B virus infection[J].Hepatol Ras，2015，45(2)：179-189.
[3]Liu Y，Li L，Liu J，et al.Activated hepatic stellate cells directly induce pathogenic Th17 cells in chronic hepatitis B virus infection[J].Exp Cell Res，2017，359(1)：129-137.
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[4]Yang C，Cui F，Chen LM，et al.Correlation between Th17 and nTreg cell frequencies and the stages of progression in chronic hepatitis B[J].Mol Med Rep，2016，13(1)：853-859.
[5]Paquissi FC.Immunity and fibrogenesis： the role of Th17/IL-17 axis in HBV and HCV-induced chronic hepatitis and progression to cirrhosis[J].Front Immuno，2017(8)：1195.
[6]Sun L，He C，Nair L，et al.Interleukin 12(IL-12)family cytokines： role in immune pathogenesis and treatment of CNS autoimmune disease[J].Cytokine，2015，75(2)：249-255.
[7]Gaffen SL，Jain R，Garg AV，et al.The IL-23-IL-17 immune axis： from mechanisms to therapeutic testing[J].Nat Rev Immunol，2014，14(9)：585-600.
收稿日期：2019-1-17;修回日期：2019-1-25
編辑/王朵梅作者简介：裴金仙(1984.8-)，女，山西平遥人，硕士，主治医师，主要从事病毒性肝炎发病的免疫机制研究, http://www.100md.com(裴金仙 陈天狮 任巧晶 王晋江 罗瑞丽)