1.2.2免疫组化分析 通过免疫组织化学证实检测肝癌组织中的UbcH10蛋白表达。使用抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物方法固定，石蜡包埋，3 μm厚的组织切片。将切片脱石蜡并使用分级系列的乙醇溶液脱水。通过与0.3%氢过氧化物酶和甲醇一起温育20 min来终止内源过氧化物酶活性。在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中漂洗后，将组织切片在耐热塑料容器内的0.01 M柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0) 中处理。然后将切片在家用微波炉中照射20 min微波辐射后，使载玻片在室温下冷却。第一抗体是对UbcH1 特异的兔抗体(1：15， Atlas Antibodies，Sigma-Aldrich，USA)。将切片与一抗孵育过夜4℃，然后使用二抗，用二氨基联苯胺显示结果。由两名在免疫组织化学方面经验丰富的独立观察者载玻片，使用基于染色程度的视觉分级系统对UbcH10表达进行定量分析。阳性肿瘤细胞的百分比分级为0～3： 0=阴性，1=1%～30%，2=31%～60%，3>60%。染色强度分级为0～3：0=无，1=弱染色，2=中度染色，3=强染色。程度(E)和强度(I)的组合通过E×I的乘积获得染色，每个斑点从0～9变化。计算每个肝癌样本的平均EI得分。EI 评分在0～3分为低表达 ......