1材料和方法

    1.1材料 本阶段实验研究总共收集深圳市龙华区人民医院普通外科和深圳市人民醫院肝胆胰外科2016年8月～2018年8月原发性肝癌手术后石蜡固定病理标本共120组，其中男性91例，女性29例，所有肝癌患者均未接受过术前新辅助放化疗及生物治疗。每组包括：①肿瘤组织：在肝癌手术标本中心留取肝癌组织;②癌旁组织：均取自距离肿瘤边缘2 cm以上正常肝组织。

    1.2试剂与仪器 选用兔抗人ZBP-89多克隆抗体和鼠抗人HIF-1α单克隆抗体均由Santa Cruz公司提供，免疫试剂盒SP-9001由北京中衫金桥技术公司生产提供;Nikon TE2000-U显微镜。

    1.3方法 免疫组化染色：先行将2种石蜡病理标本切片脱蜡，用磷酸盐缓冲液冲洗15 min，反复冲洗3次。然后将切片放于pH 9.0的缓冲液中修复，在微波中修复20 min(95℃)，冷却30 min后，再次缓冲液冲洗3次，再加入山羊血清进行封闭，至于温箱(37℃)放置1 h，然后滴加一抗(1∶200稀释兔抗ZBP-89多克隆抗体)，放入冰箱静置12 h ......