食管鳞癌组织中miRNAs差异表达谱的筛选及研究(2)
1材料与方法1.1材料来源 选取在邯郸市第一医院行食管癌切除术患者新鲜的鳞癌组织及癌旁正常组织,各3例。所有样本均经病理组织学证实,癌组织和癌旁组织一并保存,所有患者术前均无放、化疗史。
1.2主要试剂 miRNAs芯片购自美国安捷伦公司,总RNA提取试剂盒RNAprep Pure Tissue Kit购自北京TIANGEN公司,荧光定量PCR试剂盒购自Roche Applied Science公司,反转录试剂盒购自美国Applied Biosystems公司,引物由南京金斯瑞生物公司合成。
1.3方法
1.3.1组织总RNA的提取 从液氮中取出样本,称取约0.5 g组织放入钵中研磨(先用液氮预冷),边研磨边加液氮,待组织成粉末状后转到1.5 ml离心管中,按照RNA提取试剂盒操作说明书提取总RNA。
1.3.2芯片杂交及数据分析 采用安捷伦miRNAs芯片(V21.0)及配套的检测仪器及试剂盒检测 ......
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