1.2方法

    1.2.1试剂与仪器 Reverse Transcriptase XL 逆转录试剂盒购自大连TAKARA公司，琼脂糖购自西班牙Pharmerisco 公司，QIAamp RNA Blood Mini Kit 试剂盒购自天根生化科技，所有引物均由华大基因科技公司合成。主要仪器为核酸电泳系统(美国Bio-Rad公司)/梯度PCR检测仪(德国Biometra公司)。

    1.2.2 RNA提取及cDNA制備 均按试剂盒说明书操作，使用QIAamp RNA试剂盒提取总RNA，抽取患者外周血2 ml，EDTA抗凝并于-70℃保存，制备cDNA采用Reverse Transcriptase XL逆转录试剂。

    1.2.3引物设计 MTHFR C677T的引物设计由上海生工设计，Genbank获取MTHFR核苷酸序列。突变探针MTHFR 677T：5'-荧光基团-CGGG+AG+T+CGATTT-淬灭基团;野生探针MTHFR 677C：5'-荧光基团-CGGG+AG+C+CGATTT-淬灭基团 ......