1材料与方法

    1.1主要药品与试剂 10%胎牛血清、DMEM细胞培養基、胰酶、青-链霉素、PBS购自美国Hyclone公司;TRIM32兔多克隆抗体、GAPDH抗体、羊抗兔二抗购于美国proteintech公司;Lipofectamine 3000试剂盒和ECL显色试剂盒购于美国赛默飞公司;基质胶购于美国BD公司;Transwell小室购于美国康宁公司;CCK-8试剂盒购于上海碧云天生物公司;TRIM32过表达及空白对照质粒由上海吉玛生物公司合成;正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌MCF-7细胞为大连医科大学附属大连市中心医院病理科保存。

    1.2方法

    1.2.1细胞培养和转染 将MCF-10A和MCF-7细胞用含10%胎牛血清及100 IU/ml青-链霉素的DMEM培养基放入5%的CO2恒温恒湿培养箱中培养，细胞密度达到90%左右时，胰酶消化，进而传代及转染。转染步骤按照Lipofectamine 3000试剂盒说明书进行 ......