1材料和方法

    1.1材料与试剂 实验细胞HEK-293细胞购自北京裕恒丰公司;DMEM培养基(GIBCO)、胎牛血清(GIBCO)、青霉素链霉素混合液(南京凯基)、PBS(Hyclone)、胰蛋白酶(GIBCO)、opti-MEM(Invitrogen)、osa-miR168amimics(广州锐博)、Lipofectamine 2000(Invitrogen)、pmirGLO载体(优宝生物)、双荧光素报告基因检测试剂盒(Promega)。

    1.2 HEK-293细胞培养及转染 细胞在含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养，置于5% CO2，37 ℃恒温培养箱中孵育。转染前1 d，胰酶消化后铺6孔板，使其在转染日密度为70%。转染前首先弃掉完全培养基，加入无血清培养基，每孔细胞使用100 μl opti-MEM稀释2 μg报告基因质粒以及100nm olosa-miR168amimics，混匀;100 μl opti-MEM稀释2μl Lipofectamine2000转染试剂 ......