1.2方法

    1.2.1诱导iPS细胞向神经干细胞分化 把iPS细胞接种在含有丝裂霉素C的鼠胚胎成纤维细胞的饲养层，集落长满后加入胶原酶消化，先在无血清培养基悬浮培养4 d，随后置于含有维甲酸的神经干细胞培养基诱导培养4 d，再在神经干培养基中悬浮培养7 d，最后接种到经层粘连蛋白包被的24孔板中培养，分别收集诱导分化的第0、4、8、15天的细胞备用。

    1.2.2实时荧光定量PCR检测 ①总RNA提取：取适量细胞样本，加入1 mlTRIzon液的比例加入适量TRIzon液混匀，按照试剂盒说明书进行总RNA提取。②cDNA合成：应用RT-PCR法进行检测，取5 μl RNA为逆转录模板，以U6 RNA为内参基因，严格按照Fast Super RT Kit cDNA第一链合成试剂盒进行操作，加入miRNA茎环引物充分震荡混匀，并予以短暂离心处理以使溶液集中于EP管底。然后将其置于42 ℃环境中孵育30 min，置于85 ℃中孵育3 min。最后对其进行短暂离心处理，并放在冰上冷却获得逆转录产物cDNA。③实时定量PCR反应：严格按照Ultra SYBR Mixture试剂盒说明书进行荧光实时定量PCR实验 ......