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编号:13841035
钩端螺旋体引起巨噬细胞炎症反应的研究(2)
http://www.100md.com 2020年5月21日 《医学信息》 202020
     1材料与方法

    1.1实验材料 问号钩体56601株、JDL03株和JDL10株由上海交通大学病原生物学教研室提供;EMJH培养基购自美国Sigma公司;酶联免疫吸附试验试剂盒如TNF alpha Human ELISA Kit试剂盒、IL-1βHuman ELISA Kit试剂盒和IL-6 Human ELISA Kit试剂盒均购自美国Thermofisher旗下eBioscience公司;主要仪器包括细胞培养箱、科华320全自动酶标仪等。

    1.2实验细胞 实验细胞的提取:将清洁级金黄地鼠(小鼠6~8 周,雌性,购自上海生物制品所)脱颈椎处死,并浸入75%乙醇中10 s,取出小鼠并沥干,将其仰卧于不锈钢方盘上,用注射器吸6 ml生理盐水注入腹腔中,轻揉小鼠腹部2 min,使液体在腹腔内充分流动,用眼科镊提起小鼠下腹皮肤,使小鼠微倾向一侧,剪开腹部皮肤后在肌肉层剪开一个小口,用胶头滴管将腹腔液吸出转入离心管中。每只吸出量约4~5 ml。

    1.3实验细胞的培养 在4 ℃条件下,将收集的清洁级金黄地鼠腹腔灌洗液以1000 r/min离心10 min,去上清液,加入高糖DMEM细胞培养液用细胞板计数。显微镜下计数巨噬细胞,调整细胞浓度至所需,接种至细胞培养瓶,37 ℃培养箱孵育4 h,充分贴壁后弃上清液 ......
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