淫羊藿总黄酮清除DPPH自由基的紫外-可见吸收光谱研究(2)
1材料与仪器主要仪器包括分光光度计、水浴锅、天平、干燥箱、烘干器等,试剂包括DPPH、淫羊藿苷、乙醇(AR)、乙酸乙酯(AR)等,具体来源情况见表1。
2方法与结果
2.1淫羊藿总黄酮粗提液的制备 取淫羊藿叶粉碎,过60目筛,准确称取淫羊藿粉末5.0 g,置于250 ml圆底烧瓶中,加入60%乙醇45 ml室温浸泡辅助浸提30 min,70 ℃回流2次,2 h/次,将提取液抽滤,得总黄酮粗提液。保持其它条件不变,分别考察浸提温度、料液比和乙醇浓度3个单因素对提取液中淫羊藿总黄酮含量的影响,设计三因素三水平的正交实验,优化得出淫羊藿总黄酮提取率最高的最佳条件,且每个单因素做三次平行实验。以淫羊藿总黄酮提取率为标准,因素水平见表2,最后确定一种最优提取工艺,用于淫羊藿总黄酮的提取。
实验结果显示,影响淫羊藿总黄酮提取率的因素大小次序为:C>B>A,B和C因数的R较大,说明淫羊藿总黄酮提取率主要受乙醇浓度和料液比2个因素制约,而提取温度影响不显著。根据K值的大小可知,淫羊藿总黄酮提取的最优条件为A2B2C2,即微波功率为中低火-中火(300 W),提取温度为70 ℃,乙醇浓度为60%,料液比为1:25,见表3。
2.2淫羊藿总黄酮的分离纯化 取淫羊藿粗提液,用乙酸乙酯萃取,萃取液旋转蒸发浓缩,真空低温干燥至恒重,得浸膏,称取适量浸膏加入适量蒸馏水配制成一定浓度的淫羊藿总黄酮精提液备用 ......
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