1.2.9免疫印跡 取成骨诱导14 d的EMSCs，PBS洗3遍，每个孔中加入含有1%蛋白酶抑制剂的裂解液100 μl置于冰上1 h，后轻轻刮取置于EP 管中。在4℃下10000 r/min 离心10 min，吸取上清液煮沸后-20℃保存。加样品于10% SDS-PAGE电泳分离蛋白样品，350 mA 恒流转膜90 min，PVDF用3% 脱脂奶粉封闭1 h。将膜分别与对应的一抗collagen(1∶500)、osteocalcin(1∶500) 和β-tubulin 4℃孵育12 h，之后TBST 漂洗3次，10min /次。加入抗兔或抗鼠IgG-HRP(1∶5000)，37℃孵育1 h，TBST 漂洗3次，10 min/次。用超敏形ECL发光液显示阳性条带，在Typhoon系统上扫描结果，Image J软件分析灰度值。

    1.3统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行统计学分析，计量资料用(x±s)表示 ......