李 新，田 蜜，王 程

    (1.荆门市第二人民医院甲乳外科，湖北 荆门 448000；2.荆门市公安局法医鉴定中心，湖北 荆门 448000)

    乳腺癌(breast cancer)是女性最常见的恶性肿瘤，严重影响女性身心健康[1-3]。据统计[4，5]，世界乳腺癌发病率呈上升趋势，我国乳腺癌发病率的增长速度高于世界平均增长速度。近年来随着分子靶向治疗在乳腺癌中的作用越来越受到研究者重视，基因靶向治疗已逐渐成为乳腺癌研究热点[6，7]。沉默信息调节因子1(SIRT1)是Sirtuin 家族的第一个成员，参与肿瘤等多种疾病的发生，影响疾病的发展和耐药性[8-10]。研究表明[11]，siRNA-SIRT1 干扰宫颈癌细胞SIRT1 的表达，可抑制宫颈癌细胞的迁移能力；另有研究发现[12]，顺铂联合siRNA-SIRT1 可降低宫颈癌细胞耐药基因的表达水平，从而提高宫颈癌细胞对顺铂的敏感性。因此，本研究通过构建SIRT1 基因的shRNA 慢性病毒载体，观察SIRT1 在乳腺癌细胞中的表达变化，探讨SIRT1 在乳腺癌中的作用及机制，现报道如下。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2017 年1 月～2019 年12 月荆门市第二人民医院确诊的80 例乳腺癌患者的癌组织及癌旁正常组织。纳入标准：符合乳腺癌的诊断标准[13]；排除标准：精神病患者；患有其他肿瘤；有手术、化疗、放疗或抗生素治疗史的患者及不配合治疗者。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养和转染 乳腺癌细胞株[MDA-MB-2 31(BNCC337893)、SK-BR-3(BNCC100524)]和人正常乳腺细胞[MCF10A(BNCC100439)]均从Bena 培养库中购买，在37 ℃5%CO2的细胞培养箱中培养细胞。乳腺癌细胞系的培养基体系为1640 培养基(Hyclone 公司)+10%胎牛血清溶液(Gibco 公司)+1%青霉素/链霉素溶液(100X，Solarbio 公司)，MCF-10A 细胞系的培养体系为DMEM 培养基(Hyclone公司)+10%胎牛血清溶液(Gibco 公司)+1%青霉素/链霉素溶液(100X，Solarbio 公司)。随后实验将在细胞培养密度达到80%～90%后进行，转染前1 d，采用无血清培养基代替完全培养基，转染时将1×105细胞/孔的细胞接种到6 孔板上。用Lipofectamine 2000 转染试剂盒(Invitrogen ......