吴 拮，王 栋，李 静，赵成相

    (空军军医大学西京医院骨科研究所，陕西 西安 710032)

    含有钙盐的组织是一种坚硬的结缔组织，如骨组织，其基质中含有大量固定的无机盐，必须脱钙除去骨盐才可进行冷冻切片和石蜡切片，因此在制作病理切片过程中，常常需要经过脱钙处理，才能进行切片染色[1]。而选择合适的切片法至关重要，常规石蜡包埋切片，制作过程时间长，在制作过程中要经过酒精、二甲苯和包埋剂有机溶剂处理，对组织抗原有一定的损害及遮蔽，使组织内抗原活性发生改变。脱钙稍不彻底，部分标本切片出现“返砂”现象，易出现“刀痕”，水浴锅摊片过程易散烂。冷冻切片操作快捷，染色过程简便，还可以保存组织内可溶性物质，防止蛋白变性和酶的失活，从而减少了抗原的丢失。近年来的研究对椎间盘退变的机制研究更加深入，不仅要求有常规的组织结构化学染色，更要保留组织的免疫原性，因此冷冻切片的优势非常适合应用到研究椎间盘的过程。下面我们将对椎间盘骨组织进行冷冻切片具体操作过程进行深入探讨。

    1 材料与方法

    1.1 材料 标本来自空军军医大学西京医院骨科动物实验中心提供的大鼠。取大鼠尾椎标本，在4%多聚甲醛固定液(Beyotime，P0099)固定48 h，投入10%EDTA 脱钙液(西安赫特生物科技公司)中，置于阴凉通风处中持续脱钙。仪器：恒温式冷冻切片机(德国Leica，M1850)。试剂：OCT 冷冻切片包埋剂 ......