户乃丽，徐晓雪，邹林樾，田 蜜

    (首都医科大学中心实验室，北京 100069)

    自然杀伤(natural killer，NK)细胞是机体天然免疫系统的重要组成部分，与抗病毒免疫、移植免疫、自身免疫疾病及肿瘤免疫密切相关[1,2]。不同种属NK 细胞的特征性表面标记有所不同，人NK 细胞通常以CD56+CD3-表型来进行鉴定，而在小鼠中NK1.1、NKp46 和CD49b(DX5)等往往被用作鉴定NK 细胞的标志分子[3,4]。NK 细胞在体内含量较低，获取高纯度高活性的NK 细胞对于进一步研究具有重要意义。免疫磁珠分离是目前常用的纯化NK 细胞的方法之一，利用磁珠分选脾脏、血液等组织可得到纯度90%以上的NK 细胞。由于肺脏属于较韧的实质组织，含有大量的结缔组织，处理过程中需要胶原酶消化，过程中会产生一定的死细胞，磁珠分选后会有部分活性不佳的NK 细胞残留，影响分选后细胞活性。本实验拟利用密度梯度离心结合流式细胞4 色标记分选，加入识别细胞死活的染料，建立一种高速高效分离纯化小鼠肺脏NK 细胞的方法，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 选取5 只雄性C57BL/6 小鼠，SPF级，体质量28～30 g，5～6 周龄，购于首都医科大学实验动物部，饲养温度20 ℃～25 ℃，湿度40%～70%。单笼饲养，正常饮水进食。

    1.2 试剂与仪器 RPMI-1640 培养基、胎牛血清购自Gibco 公司；胶原酶V、台盼蓝试剂购自Sigma Aldrich公 司；FVS510、CD3-FITC、CD19-FITC、NKp46-PE、NK1.1-APC 抗体为Biolegend 公司产品；红细胞裂解液、流式细胞仪质控CST 微球、Accudrop beads 购自BD 公司；实验所用仪器为BDAriaⅢ型流式细胞分选仪 ......