徐晓雪

    (首都医科大学中心实验室，北京 100069)

    流式细胞术是利用流体聚焦原理，高速检测流体中单个细胞或微颗粒多种荧光标记参数的技术，具有高速、定量、单细胞多参数的特点，常用来分析血液细胞、培养细胞等复杂细胞群体中多种细胞标志物的表达差异，可以帮助医学工作者了解细胞的分化、增殖和功能状态[1]。随着流式细胞仪的发展和标记荧光的丰富，流式检测可以同时检测的指标不断增多，流式多参数检测使检测数据的信息量成倍增加，不同检测指标可以互相印证，数据可靠度大幅提升。同时还可以节省实验样品和试剂，减少样品制备步骤、大大提高流式实验的效率，成为流式技术的重要发展方向，应用范围不断扩大。目前，已经出现了超过20～30 色的流式分析方案，多参数流式技术是医学科研与临床中重要的单细胞分析技术之一[2]。但是，多参数流式技术检测影响因素复杂，各项检测参数调节范围大，操作主观性强，常规简单分析的手动调节方式无法满足检测要求，需要更加客观科学的设定检测参数才能获得理想的结果。基于此，本文以FACSymphony 流式细胞仪检测九色标记人外周血实验为例，详细介绍在多参数流式仪上客观分析多色样品的方法。

    1 材料与方法

    1.1 试剂和材料 多种荧光标记CD4 抗体参考品试剂盒，BV480 标记CD3 抗体，BUV395 标记CD4 抗体，PERCPCY5.5 标记CD8 抗体，PECY7 标记CD25抗体，BV711 标记CD27 抗体，BB515 标记CD45RA抗 体，APC-R700标记CD56抗体，AF647标记CD127 抗体，BV786CD197 抗体，溶血素，染色缓冲液，洗涤缓冲液，流式染色缓冲液，CST 质控微球(以上试剂购自美国BD 公司)。材料：人静脉血5 ml，采自健康志愿者。

    1.2 主要仪器 BD FACSymphony 流式细胞仪(美国BD 公司)，台式冷冻离心机Allegra X-15R(美国贝克曼公司)。

    1.3 样品制备

    1.3.1 人外周血全血细胞表面抗体标记九色样品制备取200μl 全血 ......