沈严严，文 南，汤 盼

    (1.南华大学附属南华医院超声科，湖南 衡阳 421002；2.南华大学衡阳医学院，湖南 衡阳 421000)

    乳腺癌(breast cancer)是除东非地区外，女性患者最常罹患的恶性肿瘤，也是全球11 个地区中因恶性疾病致死的最常见原因[1]。现如今乳腺癌的治疗方法主要有放疗、新辅助化疗、手术切除、靶向生物治疗等方式，但存在晚期转移、复发的风险，以及化疗药物耐药，给临床治疗带来了巨大困难[2]。因此，需要深入研究乳腺癌发病机制，寻找治疗乳腺癌的新通路、新靶点。微小RNA(microRNA，miRNA)通过与目标基因mRNA 互补结合负性调控mRNA 的稳定性或遏制其翻译效率从而调控生命活动，是一串内源性单链非编码RNA，其在乳腺癌中的致病作用机制的研究中已成为一大热点[3]。miR-622 近来被广泛报道是miRNA 家族中的主要成员，在多项研究中显示miR-622 可调控癌症相关通路抑制癌症发展，是癌症的抑制因子[4，5]。研究显示[4-6]，miR-622 在胃癌、乳腺癌等癌症中作用异常，而miR-622 在乳腺癌中起致癌还是抑癌作用仍存在争议。miRNA 在肿瘤中的作用机制通常与多种蛋白有关[7]。Wang X等[8]报道显示，miR-622 抑制K-Ras 的表达起抑癌作用。而生物信息学研究显示miR-622 也与EYA1有预测的可能结合位点。miR-622 与EYA1 在癌症中作用关系的研究尚不清楚，EYA1 是兼具有转录活性与磷酸酶活性的转录因子，最初在果蝇中被发现在调控眼睛形态发育中发挥重要作用。本研究采用qRT-PCR 检测人乳腺癌细胞株MCF-7 中miR-622 的表达情况，通过miR-622 inhibitor 抑制miR-622 的表达后观察癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化，以及乳腺癌细胞中EYA1 的表达情况，探讨miR-622 在乳腺癌发生、发展中的可能作用机制，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 人乳腺癌细胞系MCF-7 从南华大学附属第一医院临床研究所获取；双抗、胎牛血清、胰酶、DMEM 培养基(美国Gibco 公司)；RIPA 细胞裂解液(上海雅吉生物科技有限公司)；Western blot试剂盒、BCA 试剂盒、HE 染色试剂盒(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)；GAPDH 一抗、EYA1 一抗、HRP Goat Anti-Rabbit IgG(美国ABclonal 公司)；CCK-8 试剂盒、ECL 高效化学发光试剂盒(美国Genview 公司)；PVDF 膜(美国GE 公司)；预染蛋白marker(上海百赛生物科技有限公司)；通用型microRNA 提取试剂盒(北京金百特生物技术有限公司)；miRNA 1st StrandcDNA Synthesis Kit、miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)；引物(上海生工生物工程股份有限公司)；DEPC 水(上海碧云天生物技术有限公司)；miR-NC、miR-622 inhibitor、Ribofactamine 试剂盒(广州锐博生物技术有限公司)；Matrigel(美国BD公司Becton ......