张新颖

    (天津市第四中心医院中医科，天津 300241)

    中药复方研究注重中药作用整体性，往往局限于临床研究及动物实验研究[1]。有研究显示，直接应用中药复方作用于实验细胞后，细胞出现大量死亡现象。另有学者认为，中药在临床应用过程中常以复方形式治疗疾病，复方经过人体的消化与吸收后发挥药效可能不同于中药单一的作用效果。目前，中药血清药理学与血清药理化学的研究[2]及两者的相结合成为最新的研究热点，为中药复方研究及发展提供了新的研究方向[3]。本实验中提取中药复方含药血清作用于细胞实验中，探索细胞研究中的方法及应用，旨在为研究者开展血清药理学研究提供相应的理论与方法支持。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 雄性SD 大鼠11 只，体重180～220 g，6～8 周龄，由北京军事医学科学院实验动物中心提供，符合动物伦理要求。

    1.2 试剂及仪器 芪参益气滴丸(天津天士力制药集团股份有限公司生产)、生理盐水、CCK8(日本同仁)、DMEM 培养基(Gibco 公司)、胎牛血清(FBS 兰州百灵优级血清)、倒置相差显微镜、二氧化碳恒温培养箱(IL-161HI)、酶标仪(flexstation3)、离心机(LD5-2A)。

    1.3 大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)体外培养 SD 大鼠提取原代细胞：3%的水合氯醛腹腔麻醉，打开胸腔，用眼科剪及眼科镊迅速分离出胸主动脉，放入无菌加入1%双抗的PBS 中。采用高糖DMEM 培养基培养，其中含有20%的FBS，1%双抗，细胞在37 ℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养，1 周后观察细胞生长情况；若贴壁良好，观察到细胞已经从组织块爬出，可更换细胞培养液，待细胞生长至80%～90%融合时，进行首次传代[4]；每3 天传代1 次，传至第3 代更换为含10%胎牛血清DMEM 培养基培养，并经血管平滑肌肌动蛋白(α-actin)免疫组织化学鉴定[5，6]。倒置显微镜直接观察细胞形态并拍照。

    1.4 芪参益气滴丸含药血清制备 首先将大鼠进行标号，应用随机数字表法进行分组，分为含药血清组6 只，正常血清组5 只 ......