孙衍，渠海，宋祺，申一凡，王俪娟，牛晓红

    (长治医学院附属和济医院内分泌科1，普通外科2，山西 长治 046011)

    糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是一种以持续性蛋白尿和进行性肾功能下降为特征的临床综合征[1]。据报道[2]，DN 发生在糖尿病患者中的机率占20%～50%，并且是发生终末期肾脏疾病的常见原因。此外，DN 通常与动脉高血压和心血管疾病发病率和死亡率的增加有关，严重影响患者的生命安全及预后[3，4]。因此，探究治疗DN的措施及手段显得尤为重要。微小RNA(miRNA，miR)是一类非编码的单链小分子RNA[5]。最近，越来越多的证据表明miRNA 与DN的发生和发展密切相关[6，7]。在高糖(high glucose，HG)处理的肾小球系膜细胞中，过表达miR-141 可促进细胞凋亡并加剧炎症[8]。因此，miRNA 可能成为DN的诊断性生物标志物和治疗靶标。最近的一项研究表明，与2 型糖尿病相比，DN 患者中miR-320c的表达升高，这表明miR-320c的过表达可能对DN有害，但其潜在机制尚不清楚[9]。此外，另一项研究表明抑制miR-320c 可通过靶向KIF14 促进nephrin及podocin 表达，抑制HG 诱导的足细胞损伤[10]。基于以上研究结果，本研究以肾小管上皮细胞HK-2为研究对象，探索miR-320c 在HG 诱导的HK-2 细胞中的表达及其对DN 作用的可能分子机制，旨在为DN 诊断及靶向治疗提供新思路。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 人肾小管上皮细胞HK-2 购自武汉普诺赛生物生命科技公司；葡萄糖购自美国sigma公司；DMEM 培养基、胎牛血清(FBS)购自美国Gibco 公司；胰蛋白酶、Lipofectamine2000 购自美国Thermo Fisher 公司；miR-320c inhibitor 及inhibitor NC 由广州锐博生物科技公司合成；兔抗人的转化生长因子β1 TGF-β1、p-Smad2/3 抗体购自美国Santa Cruz 公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗购自上海艾博抗公司；Trizol、逆转录试剂盒、荧光定量PCR 试剂盒购自日本TaKaRa 公司；Ace-QqPCR SYBR Green Mix，高敏型ECL 化学发光检测试剂盒及RIPA 裂解液均购自南京诺唯赞生物公司；6 孔及24 孔细胞板购自美国Bio-Rad 公司；Transwell cell(孔径8.0 μm)购自美国Corning 公司；Matrigel 胶购自美国BD 公司 ......