张旭东，刘浩昂，兰 凯，廉 婷，王志浩，陈 蕊，刘碧波

    (1.西安医学院临床医学院中尼友好拉吉姆医学实验室，陕西 西安 710021；2.西安医学院临床医学院陕西省呼吸病预防与诊治工程中心，陕西 西安 710021；3.西安医学院第一附属医院妇产科，陕西 西安 710077)

    脊柱外伤(spine injury，SCI)是一种严重的损害，会造成运动和感觉降低及其他并发症[1]。目前治疗神经疼痛的药物包括普瑞巴林、加巴喷丁等[2，3]。由于中枢神经疼痛在不同阶段有不同的机制，且这些药物都存在严重的副作用。因此，亟须探寻新的治疗药物并了解其作用机制。二十二碳六烯酸单乙醇酰 胺(docosahexaenoyl ethanolamide，DHEA)、二十碳五烯酸单乙醇酰胺(eicosapentaenoyl ethanolamide，EPEA)是Ω-3 多不饱和脂肪酸DHA、EPA 的衍生物[4]。DHEA、EPEA 具有抗炎、抗肿瘤效果，然而其在中枢神经性疼痛的作用仍然未知[5]。研究表明[6]，中枢神经疼痛与小神经胶质细胞和星形胶质细胞的状态有密切关系。本研究主要探究DHEA 和EPEA 在脊柱外伤后对小神经胶质细胞和星形胶质细胞的作用，旨在为中枢神经性疼痛治疗提供理论依据和实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料 DMEM 高糖培养基、GlutaMAXTM、HEPEs、胎牛血清FBS、双抗(美国英杰生命技术有限公司)，多聚赖氨酸PDL、脂多糖LPS、Hoechst(美国默克公司)，细胞培养皿(广州杰特生物有限公司)，DHEA、EPEA(美国开曼生物科技有限公司)，山羊血清、绿色荧光二抗、iNOS、GFAP(美国生命科技有限公司)。

    1.2 小神经胶质细胞和星形胶质原代细胞培养

    1.2.1 小神经胶质细胞的获取方法 细胞混悬液4 ℃1500 r 离心10 min，弃去上清加入DMEM 重悬后，细胞计数。取用18 mm 盖玻片置于12 孔细胞盘，将稀释后的细胞混悬液分别铺于盖玻片上。最后将附着好的12 孔培养皿置于37 ℃，5%CO2，培养箱培养。

    1.2.2 星形胶质细胞的获取 加入PBS 溶液冲洗3次，尽可能去除残留的小神经胶质细胞 ......